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背入式腹膜后双肾蒂夹闭制作肾缺血再灌注损伤模型的技术方法

一、1.背入式腹膜后双肾蒂夹闭操作步骤

(1)首先，对实验动物进行麻醉，通常采用腹腔注射戊巴比妥钠进行全身麻醉，剂量为40-50mg/kg体重。麻醉成功后，动物呈安静状态，肌肉松弛，呼吸平稳。随后，将动物固定于手术台上，确保手术过程中动物的安全和稳定。接着，沿腹中线切开皮肤，长度约10-15cm，逐层分离皮下组织，暴露腹膜。在腹膜上找到两侧输尿管，小心分离输尿管两侧的脂肪和结缔组织，避免损伤周围器官。

(2)在充分暴露肾蒂部位后，使用显微外科器械进行精细操作。首先，用无损伤血管夹夹闭肾动脉和肾静脉，确保肾蒂的完全阻断。夹闭时间通常控制在30-60分钟之间，以模拟肾缺血再灌注损伤。在此期间，密切观察动物的生命体征，包括心率、血压和呼吸频率，以及尿液颜色的变化。实验过程中，若动物出现血压下降、心率加快或呼吸急促等异常情况，应立即松开夹闭，给予相应的急救措施。

(3)夹闭完成后，缓慢松开血管夹，恢复肾血流。此时，动物的生命体征应逐渐恢复正常，尿液颜色也应逐渐变清。观察肾缺血再灌注损伤模型制作的成功标志，包括肾脏颜色变化、尿液颜色变化以及动物生命体征的稳定。在实验过程中，可结合实际案例，如采用大鼠作为实验动物，通过对比实验组与对照组的肾组织病理学变化，评估肾缺血再灌注损伤模型的可靠性。此外，实验数据应详细记录，包括动物体重、夹闭时间、恢复血流时间以及术后动物的存活情况等。

二、2.肾缺血再灌注损伤模型的观察与评估

(1)观察与评估肾缺血再灌注损伤模型的主要指标包括动物的生理指标、尿液指标和组织学指标。生理指标方面，需监测动物的心率、血压、呼吸频率和体温等生命体征。尿液指标包括尿量、尿液颜色和透明度等。组织学指标则通过采集肾脏组织进行病理学分析，观察肾小管、肾小球和肾间质等结构的损伤情况。

(2)在生理指标方面，实验开始前应对动物进行基础生理指标的记录，包括心率、血压和呼吸频率等。在肾缺血再灌注过程中，应每隔一定时间（如15分钟）监测一次生命体征，并记录数据。实验结束后，对动物进行解剖，观察肾脏的外观变化，如肾脏体积、颜色和硬度等。尿液指标方面，应记录实验前后的尿量、尿液颜色和透明度，以评估肾脏功能的变化。

(3)组织学评估是肾缺血再灌注损伤模型观察与评估的重要环节。实验结束后，取肾脏组织进行固定、切片和染色处理。通过显微镜观察肾小管、肾小球和肾间质等结构的损伤情况，如肾小管上皮细胞脱落、肾小球硬化、肾间质纤维化等。同时，对切片进行图像采集，以便后续进行定量分析。此外，可通过免疫组化技术检测肾脏组织中相关炎症因子和细胞因子的表达水平，进一步评估肾缺血再灌注损伤的严重程度。

三、3.模型动物的护理与术后处理

(1)术后处理首先要求保持动物体温的稳定，通常通过使用加热毯或温湿度控制的手术室来维持动物体温在37-38℃之间。对于术后出现体温下降的动物，应立即采取升温措施，如使用暖风或红外线灯。在护理过程中，监测动物的体温变化，记录数据，并与术前体温进行比较，以评估动物的恢复情况。例如，在处理一只体重200克的大鼠时，术后体温下降至35℃，通过使用红外线灯照射，体温在30分钟后恢复至37℃。

(2)术后动物的疼痛管理同样重要。通常采用非甾体抗炎药（NSAIDs）如布洛芬进行疼痛控制，剂量为每千克体重5-10毫克，每12小时一次。在护理过程中，需密切观察动物的行为变化，如活动减少、反应迟钝等，这些可能是疼痛的迹象。例如，在一组实验中，使用布洛芬后，疼痛评分从术前平均6分降至术后2分，显示出良好的镇痛效果。

(3)术后动物的饮食和饮水管理也非常关键。术后初期，动物可能食欲不振，此时应提供易于消化的流质食物，如营养液或特制的营养膏。在恢复期间，逐渐过渡到固体食物。同时，确保动物有充足的饮水，以预防尿路感染。在护理过程中，应定期检查动物的尿量，若尿量减少，可能需要调整饮食和饮水计划。例如，在一组实验中，通过调整饮食和饮水，术后第3天，所有动物的尿量均恢复至正常水平。

四、4.模型动物的病理学分析

(1)病理学分析是评估肾缺血再灌注损伤模型效果的关键步骤。通过对肾脏组织的切片进行HE染色，可以观察肾小管上皮细胞的形态变化，如细胞肿胀、脱落和坏死等。在实验组中，HE染色结果显示肾小管上皮细胞肿胀明显，部分细胞出现脱落和坏死，这与肾缺血再灌注损伤的病理生理过程相符合。

(2)通过PAS染色可以观察肾小管基膜和肾小球结构的完整性。在肾缺血再灌注损伤模型中，PAS染色显示肾小管基膜变薄，肾小球毛细血管袢扩张，部分肾小球出现硬化现象。这些病理学变化进一步证实了肾缺血再灌注损伤的存在。

(3)免疫组化技术用于检测肾脏组织中炎症因子的表达。在肾缺血再灌注损伤模型中，