细胞工程第五章.ppt

培养方法的发展双盖片悬滴培养法旋转管培养的方法灌注小室培养法方便了更换培养液的操作，大大降低了污染的概率培养物可交替地接触培养液和气体环境，利于细胞或组织成长供新鲜培养液流入小室和旧培养液排出，从而使细胞生活在不断更新的培养液中12天然培养基(胎汁、血浆和血清)人工合成培养基（需添加血清）无血清细胞培养基（用激素、生长因子替代血清）培养液的发展天然培养基(胎汁、血浆和血清)人工合成培养基（需添加血清）无血清细胞培养基（用激素、生长因子替代血清）培养液的发展动物细胞大规模培养概述01动物细胞大规模培养技术的概念02指在人工条件（除满足培养过程必需的营养要求外，还要进行pH和溶解氧的最佳控制）下，在细胞生物反应器中高密度大量培养动物细胞用于生产生物制品的技术。03第二节动物细胞的大规模培养动物细胞大规模培养技术的应用生产疫苗目前，通过动物细胞大规模培养已实现商业化的疫苗产品有口蹄疫疫苗、狂犬病疫苗、牛白血病病毒疫苗、脊髓灰质炎病毒疫苗、乙型肝炎疫苗、疱疮病毒疫苗、巨细胞病毒疫苗等。生产干扰素生产多肽和蛋白质类药物生产人源化单克隆抗体（三）动物细胞大规模培养的一般工艺流程1—组织块；2—组织块碎片；3—消化；4—离心；5—原代培养；6—传代培养；7—液氮罐保存细胞；8—复苏培养；9—扩大培养；10—大规模生物反应器培养动物细胞大规模培养的方法和操作方式动物细胞大规模培养的方法根据动物细胞的培养特性不同，可采用悬浮培养、贴壁培养和固定化培养三种培养方法进行大规模培养。12指细胞在生物反应器中自由悬浮生长增殖的培养方法。01主要用于非贴壁依赖型细胞培养，杂交瘤细胞、血液白细胞、淋巴细胞、某些肿瘤细胞等属于此类细胞。02贴壁型细胞贴附在微载体上或者包裹在微囊中后可以接种在适当生物反应器中实现悬浮培养。03悬浮培养悬浮培养的优点：操作简便，培养条件比较均一，传质和传氧效果比较好，容易扩大培养规模，在培养设备的设计和实际操作中可以借鉴许多细菌发酵的经验。悬浮培养的缺点：不能采用灌流培养，导致细胞密度较低，另外只有少数细胞适合悬浮培养。搅拌式生物反应器气升式生物反应器01利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞。利用B淋巴细胞产生抗体的功能。利用肿瘤细胞无限增殖的特性。利用细胞融合技术将两种细胞融合获得具有B淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞。0203041接受抗原刺激后，能分泌针对该抗原的特异性抗体，在体液免疫中具有重要功能。B淋巴细胞本身是一种终末分化细胞，通常不再进行细胞分裂，存活一段时间后便会死亡——短命细胞。2B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的特性3B淋巴细胞(Blymphocytes)：4杂交瘤技术产生的3个技术关键骨髓瘤细胞(myelomacells):恶性增殖的转化细胞，只要营养条件适合可永远分裂和存活——长命细胞。经筛选与驯化，现已建立多种骨髓瘤细胞株——没有抗体分泌物。12细胞融合技术脾细胞(B淋巴细胞)骨髓瘤细胞杂交瘤细胞长命不分泌抗体分泌抗体短命分泌抗体长命1984年Nobel医学奖杂交瘤技术(hybridomatechnology）定义用骨髓瘤细胞(myelomacell)与经特定抗原免疫刺激的B淋巴细胞(antigenstimulatedBlymphoblast)融合得到杂交瘤细胞(hybridomacell)。杂交瘤细胞既能象骨髓瘤细胞那样在体外无限增殖，又具有B淋巴细胞产生特异性抗体的能力，通过克隆化培养获得纯的细胞可以生产高纯度的单克隆抗体。1、提取细胞并培养2、细胞融合B淋巴细胞的融合细胞骨髓瘤细胞的融合细胞B淋巴细胞和瘤细胞融合的细胞3、获得的杂交细胞（继承双亲的特点）检验和筛选4、杂交细胞进行细胞培养5、得到化学性质单一的，针对性强的抗体培养基筛选单克隆抗体的制备过程亲本细胞的选择B淋巴细胞的获得经特定抗原免疫的能产生目的抗体的动物淋巴细胞；免疫动物种系要与骨髓瘤细胞系一致或有相近的亲源关系。如：鼠－鼠杂交瘤细胞；人鼠或鼠兔杂交瘤细胞不稳定。一般要经过初次免疫、第二次免疫(向动物腹腔内注射抗体)、加强免疫(向动物静脉内注射抗体)三个过程。一般取最后一次加强免疫3天以后的脾脏，制备成细胞悬液。0102骨髓瘤细胞系不能分泌抗体，否则杂交瘤细胞将分泌混合抗体；要选择次黄嘌呤鸟嘌呤转磷酸核糖激酶缺陷型（HGPRT-）或胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型（TK-）。0102骨髓瘤细胞：需同时具有两个独特的性质骨髓瘤细胞的获得骨髓瘤细胞系应和免疫