体外皮肤吸收试验.docx

PAGE1

附件1

体外皮肤吸收试验（征求意见稿）

SkinAbsorption：InvitroMethod

1范围

本文件规定了体外皮肤吸收试验的基本要求和方法。

本试验方法适用于单一成分的化妆品原料。

2试验目的

预测和评价化妆品原料在离体皮肤中的经皮吸收率。

3定义

3.1受试物testsubstances

被测试的化妆品原料，为单一化学物质。

3.2未吸收量unabsorbeddose

暴露后从皮肤表面洗掉的受试物，以及非遮挡性遮盖物上存在的受试物，包括暴露期间从皮肤上挥发出来受试物的总量。

3.3吸收量absorbeddose

在一定时间内到达皮肤和接收液的受试物的量。

4试验原理

在特定条件下，将受试物（可以是放射标记物）暴露于扩散池中的皮肤表面一定时间后，采用适当的清洗程序和方法除去皮肤表面的受试物；并在整个试验过程中，设置不同的时间点采集接收液，采用适当的方法测试受试物或其代谢产物的物质的量。

当受试物具有代谢活性时，可以采用适当的方法来分析其代谢活性产物。也可以在试验结束后，采用适当的方法测定受试物及其代谢产物的分布情况。

在本标准和指导性文件所描述的条件下，采用接收液和受试皮肤中的受试物的量来监测给定时间内受试物的吸收情况。同时应测定从皮肤表面冲洗下来的和留在皮肤里的受试物，包括分布和回收率。残留在皮肤角质层中的受试物可能会被吸收。一般试验周期为24h，角质层的残留量不会显著影响物质的系统暴露量，通常不计入安全评估参数皮肤吸收率的计算。

5试验方法

5.1扩散池

扩散池由供给室和接收室组成（图1为典型扩散池样例），离体皮肤放置于两者之间，其与扩散池之间应有良好的密封性，能较好控制扩散池及其内容物的温度，并保证与皮肤接触的接收液的混合良好和取样方便；静态式或流通池式扩散池均可使用。正常情况下，供给室在暴露于有限剂量受试物过程中保持开放，但在无限剂量和部分有限剂量的情况下，供给室可以封闭。

5.2接收液

接收液应优先选择有益于生理的溶液，需提供接收液的精确组分，并证实受试物在接收液中能充分溶解，不影响皮肤吸收。另外，接收液不能影响皮肤的完整性。在循环流动系统中，流速不能妨碍受试物扩散进入接收液。在静态渗透式系统中，接收液应连续搅拌并有规律取样。如果要研究受试物在皮肤中的代谢效应，整个试验过程中接收液必须能维持皮肤的活性。

5.3皮肤制备

皮肤来源可为人类或动物，须符合我国相关伦理要求，首选活体皮肤。非活性皮肤，如采用表皮层（酶、热或化学分离的）或用植皮刀分离的皮肤，应避免使用太厚的皮肤（约小于1mm），证明其皮肤屏障完整性后可使用。同时还应确定皮肤种类、解剖位置以及制备技术。动物皮肤来源首选小型猪。每个受试物至少进行4次重复试验。

5.4皮肤完整性

应正确制备和储存皮肤标本，使用前检查皮肤及其屏障的完整性。需要研究受试物在皮肤的代谢作用时，应使用新鲜皮肤，并在确保其实验过程中的代谢活性。一般新鲜的离体皮肤应在24h内使用，也可证明合理可行的情况下，根据代谢酶系统和贮藏温度的不同而适当调整。

5.5受试物制备

受试物可以放射性标记或采用其他定量方法。受试样品的制备尽可能与实际使用的状态保持一致，偏离使用情况的制备应做合理说明。

5.6受试物浓度和组成

通常将受试物配制成系列浓度，其浓度范围应覆盖人体实际接触的可能暴露范围。受试物配制过程中需确保其稳定性和均一性，对于固体、半固体制剂和混悬液，需验证其中受试物的均一性。

5.7皮肤暴露

根据人体可能接触受试物的情况，一般选择有限剂量暴露。剂量应模仿人体暴露量，通常固体受试物为2mg/cm2~5mg/cm2，液体受试物为10μL/cm2。如有偏差，需根据预期的上样条件、研究目标或试验准备的物理特性进行解释。如实验设计为无限剂量暴露时，则不需遵循上述剂量要求。

5.8温度

受试物皮肤吸收一般属于被动吸收，其受温度的影响较大，因此实验时扩散室和皮肤应保持恒定接近于皮肤正常温度（32℃±1℃）。不同的扩散池可根据自身情况调整水浴或干加热到一定温度，以确保离体皮肤温度在其正常生理标准。实验室相对湿度保持在30%~70％之间。

5.9暴露时间和取样

一般情况下安全评估仅做24h暴露，皮肤完整性超过24h就会变差，因此采样时间一般不建议超过24h。但在特殊情况下也可采用更短的暴露时间，如渗透迅速的或实际使用时间非常短暂的受试物。若需要了解受试物透过行为，应根据受试物的吸收特性确定接收液的采样点。接收液的采样点应满足能够以作图形式表现被试物的透皮吸收情况。实际采样频率需基于试验前信息（如受试物理化性质等），试验周期内通常需要6个~12个采样点。

5.10样品分析

对试