组织制片技术概述.pptVIP

取材动物的处死处死动物要求手法迅速、快捷，避免动物因过度痛苦而产生组织细胞的变化。处死动物的几种常用方法：麻醉法空气栓塞法击头法颈椎脱臼法破坏脑和脊髓股动脉放血选择动物选择取材部位选择切面方向取材的方法：根据实验工作的目的选择动物取材应根据实验工作的目的选择动物的种类、组织部位和材料大小。肝脏—猪肝卵巢—猫胃—狗运动终板—爬虫类动物肥大细胞—大、小白鼠的皮下组织间皮和内皮—蛙的肠系膜铺片最好根据器官组织的结构特点选择部位：胰腺—胰尾部脊髓的运动神经元—颈膨大和腰膨大处肺—肺门胃—胃底部根据器官组织的结构特点选择切面方向01肾脏—肾门处作纵切02头皮—顺毛根的方向纵切03大小肠的环行皱襞—纵切04气管和食管—横切05组织新鲜注意环境温度的影响材料应小而薄1．5×1．5×0．5厘米3防止组织损害防止组织变形防止组织污染010203040506应注意的问题：固定的目的：防止组织细胞产生自溶和腐败使细胞易于着色使组织适度硬化固定和固定剂直接固定灌注固定：局部灌注固定全身灌注固定。固定的方法：蒸汽固定固定的注意事项：01固定剂的用量一般为组织块体积的15倍左右02固定剂的配制现配现用最为理想03还原剂（如甲醛）尽量不要与氧04化剂（如重铬酸钾）配伍?05固定的时间一般情况下固定24小时既可达到06固定要求。0701流水冲洗02脱黄03脱汞04脱甲醛色素05组织漂白06脱钙（酸溶液脱钙、螯合脱钙、电解脱钙）固定后处理：固定剂01重铬酸钾、丙酮、铬酸、四氧化锇03苦味酸—硫酸液、Carnoy氏液、Helly氏液05单纯固定剂甲醛、乙醇、冰乙酸、升汞、苦味酸、02混合固定剂中性甲醛液、乙醇—甲醛液、Bouin氏液、04甲醛(Formeldedhyde)固定浓度：10%--20%水溶液固定时间：12小时—24小时固定后处理：流水冲洗12小时—24小时配制方法：甲醛原液10ml—20ml生理盐水（或蒸溜水）90ml—80ml特性：甲醛原液浓度为40%。甲醛放置时间过长易产生白色沉淀“三聚甲醛”，氧化后变为甲酸，使溶液变为酸性，严重时可影响到细胞核着色。因此需长期保存的甲醛溶液应加入适量的碳酸镁或碳酸钙作为中和剂。酸性甲醛固定的组织易产生甲醛色素，固定后须用硷性溶液洗涤乙醇(Ethylalcohol)固定浓度：80%--90%乙醇液固定时间：一般4小时—12小时固定后处理：直接入脱水剂配制方法：无水乙醇80ml—90ml蒸馏水20ml—10ml特性：乙醇易被氧化成乙醛继而变为醋酸，所以不能与铬酸、重铬酸钾、锇酸等氧化剂混合。乙醇具有固定、脱水等多种功能，单独作固定剂使用时其渗透力较差，因此取材应薄，才能固定好。经乙醇固定的组织细胞核着色较差。高浓度乙醇（通常指90%浓度以上）不溶解细胞内糖原，宜做保存糖原的固定剂。组织在高浓度乙醇中放置时间过长时，收缩明显，易发脆，影响制片。50%以上浓度的乙醇可溶解组织内脂肪、类脂体、色素等，因此不能用作以上物质的固定剂。1中性甲醛液2配制方法：40%甲醛120ml蒸馏水880ml3磷酸二氢钠4g磷酸氢二钠13g6适用组织：实验室常备固定剂，适用多种组织的固定。5固定后处理：流水冲洗24小时。4固定时间：24小时。乙醇—甲醛液（A—F液）1配制方法：95%乙醇90ml40%甲醛10ml2固定时间