血涂片制备和染色.ppt

正常情况：血膜外观呈淡琥珀色。在显微镜下红细胞染成粉红色，在厚薄均匀处略有碟状感。白细胞胞质中的颗粒能显示出各种细胞的特有色彩，细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。染色环境偏酸：则红细胞和嗜酸性颗粒偏红，白细胞核呈浅蓝色或不着色，染色过酸pH3.5时，则呈现一片红色，白细胞中除嗜酸性颗粒外均不着色。染色环境偏碱：则所有细胞呈灰蓝色，微偏碱者红细胞暗红、白细胞颗粒深暗。嗜酸性颗粒可染成暗褐色甚至黑紫色或蓝色。中性颗粒也偏粗染成紫黑色，血膜过厚的地方呈绿色。321【染色结果评价】姬姆萨染色法[原理]吉姆萨染液由天青，伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。但本法对细胞核和寄生虫着色较好，结构显示更清晰，而胞质和中性颗粒则着色较差。吉姆萨染料1.0g甘油66.0ml甲醇（AR）66.0ml[染色方法]1.甲醇固定干燥血膜3-5min2.将血膜在染液中浸染10-30min3.流水冲洗,待干后镜检[试剂]（三）瑞氏-吉姆萨染色【原理】将瑞特染料和吉姆萨染料按一定比例混合后对细胞进行染色，其染色原理同瑞特和吉姆萨染色法，但染色效果更佳，因为其综合了瑞士和吉姆萨染色法的优点。瑞特染料1.0g吉姆萨染料0.3g甲醇加至500ml先将瑞特染料和吉姆萨染料充分研磨混匀，甲醇溶解倒入容器中，未溶解完的继续加入甲醇研磨，重复多次，最后把染液加至500ml。【瑞氏-吉姆萨染色试剂】21[瑞氏-吉姆萨染色方法]血片滴加染液5滴盖满血膜，2min后加入磷酸盐缓冲液（同瑞氏染液）缓冲液10滴，10min后用流水冲洗干净，待干后镜检。【方法学评价】瑞氏染液和吉姆萨染液对细胞进行染色时有各自的显色特征，前者对细胞质和颗粒着色较好，后者对细胞核结构显示清晰。因此将二者结合，能取长补短、集中优势，用该混合染液对血细胞进行染色，其细胞核、细胞质和细胞内颗粒均着色鲜艳，对比鲜明。瑞氏-吉姆萨混合染色法是临床上广泛使用的方法。血液一般检验主讲人:李学民1血标本：2全血：血细胞+血浆;临床血液学检查，血细胞计数、分类和形态学检查3血浆：全血除去血细胞；血浆病理性和生理性化学成分的测定，内分泌激素、凝血因子（钙除外）、血栓和止血检查4血清：离体后血液自然凝固后析出的液体成分（除纤维蛋白原等凝血因子）；临床化学和临床免疫学检查，可见血浆与血清的主要区别是，血清中不含纤维蛋白原。复习血液标本采集和抗凝剂选择01静脉采血法部位：主要是肘静脉。还可以在：手背、内踝、股静脉，幼儿可采用颈外静脉采血注意事项:抽血时只能外抽不能内推，以免形成空气栓塞0203一、采血方法部位：WHO推荐中指或无名指尖内侧为宜，耳垂采血受温度影响大；半岁以下拇指或足部，特殊人员视情况而定。采血步骤及注意事项：应严格实行一人一针制；穿刺的深度的适当，切忌用力挤压，以免混入组织液，影响检验结果。用消毒干棉球擦去第一滴血，以后流出的血液可以使用。A皮肤采血法（毛细血管采血法）B抗凝：用物理或化学方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性，以阻止血液凝固抗凝剂：能够阻止血液凝固的物质，称抗凝剂0102二、抗凝剂选择使用方法：15g/L浓度EDTA和血液1：10适用范围：血细胞形态、血小板计数。但影响血小板聚集和白细胞吞噬功能所以不适合做凝血象检验及血小板功能试验抗凝原理：螯合钙离子乙二胺四乙酸（EDTA）盐草酸盐（sodiumoxalate）草酸钠、草酸钾、草酸铵01原理：草酸盐可与血中钙离子生成草酸钙沉淀，从而阻止血液凝固02用范围：凝血象检查0301040203原理：低浓度时抑制因子Ⅸa、Ⅷ和PF3之间的作用，加强抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成,还能抑制凝血酶的自我催化及抑制因子Ⅹ的作用；高浓度时阻断凝血酶和纤维蛋白的反应适用方法：1g/L浓度的肝素钠与血液1：10优点：抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易溶血、能耐高温适用范围：红细胞检验（红细胞计数、血红蛋白测定、红细胞比积）和多种生化分析肝素（heparin）原理：螯合钙离子01020304使用方法：配成109mmol/L的浓度和血液1：9106mmol/L的浓度和血液1：4适用范围：止血学检验、血沉、输血保养液（毒性小）枸橼酸盐（枸橼酸三钠）血液标本检验后的处理血源性污染是医源性污染的主要来源之一