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2025-01-24 发布于广东
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红肉火龙果糖转运蛋白基因HpSWEET7的表达和转运活性鉴定.docx

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红肉火龙果糖转运蛋白基因HpSWEET7的表达和转运活性鉴定

红肉火龙果糖转运蛋白基因HpSWEET7的表达和转运活性鉴定（1）．．4

一、内容概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.2研究目的与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.3研究方法与技术路线．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

二、材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8

2.1基因克隆与表达载体构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

2.2转化与筛选．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

2.3表达载体的验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

2.4货运与保存．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

三、HpSWEET7蛋白的序列分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

3.1序列比对与结构预测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

3.2功能域及信号肽预测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16

3.3基因表达与蛋白纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

四、HpSWEET7蛋白的表达与定位．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18

4.1转化细胞系的建立．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

4.2蛋白印迹检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

4.3光镜下观察．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

五、HpSWEET7蛋白的转运活性检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

5.1胰岛素转运实验．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

5.2果糖转运实验．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24

5.3丙酮酸转运实验．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

六、结果与讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26

6.1蛋白表达与纯化结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

6.2胰岛素、果糖和丙酮酸的转运效率．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

6.3转运活性的影响因素分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

七、结论与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

7.1研究结论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

7.2研究不足与局限．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

7.3未来研究方向．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33

红肉火龙果糖转运蛋白基因HpSWEET7的表达和转运活性鉴定（2）．34

一、内容概括．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34

1.1红肉火龙果的研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35

1.2糖转运蛋白基因的研究进展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36

1.3研究目的与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37

二、实验材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38

2.1实验材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39

2.1.1植物材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．

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