菊花的组织培养(经典).ppt

酒精处理用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗消毒液处理取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液材料的切取和接种接种室消毒污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空气消毒，酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射20分钟无菌操作要求操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。（三）接种菊花的组织培养指植物的离体部分（包括任何器官、组织、细胞或原生质体），在人工控制的培养基及环境条件（温度及光照）下，得以生长和分化成完整植株的一种无菌培养技术。又称：植物离体培养一、植物组织培养的概念离体组织完整植株人工控制条件离体组织完整植株人工控制条件1、离体2、无菌3、营养物质：4、激素：5、其他外界条件：大量元素微量元素有机物生长素细胞分裂素pH值温度光照原因：是生物体的每一个细胞都含有该物种所特有的全套遗传物质都有发育成为完整个体所必需的全部基因概念：细胞的全能性是指已分化的细胞具有发育成完整个体的潜能。植物细胞的全能性植物组织培养原理：植物全能性的表达离体的植物器官、组织、细胞胚状体根、芽愈伤组织人工种子再生植株脱分化受精卵胚胎干细胞其他干细胞体细胞实例已分化的植物细胞，仍具有全能性全能性的比较:高度分化的动物细胞，全能性受到限制。但细胞核仍然保持着全能性在个体发育中，相同细胞的后代在形态、结构、生理功能上发生稳定性差异的过程过程：如：受精卵增殖、分化形成组织、器官、系统基因在特定的时间和空间条件下的选择性表达的结果结果：细胞的分化概念：实质：形成不同的细胞和组织全能性：稳定性：细胞分化是稳定的，一般是不可逆转的已分化的细胞，仍具有发育的潜能持久性：是一种持久性的变化，它发生在生物体的整个生命过程中,在胚胎期达到最大限度⑤特点：3、植物组织培养过程:离体组织或细胞植物体脱分化细胞分裂素≈生长素愈伤组织芽根细胞分裂素生长素细胞分裂素生长素再分化不需要光需要光愈伤组织愈伤组织:细胞排列疏松而无规则,是高度液泡化的、成无定形状态的薄壁细胞来源：由离体组织、细胞脱分化产生不具有叶绿体，不能进行光合作用，生命活动要由培养基提供能量。分裂能力强，可用于细胞培养，基因突变不同植物的组织培养难度不同同一种植物的不同组织培养难度不同1、外植体的选取大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S微量元素：Fe、Mn、B、Zn、Mo、Cu、I、Co有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等未开花植物的茎上部新萌生的侧枝2、培养基的配制(MS培养基)二、影响植物组织培养的因素：讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。3、不同植物激素使用顺序使用顺序实验结果先生长素，后细胞分裂素有利于细胞分裂但不分化先细胞分裂素，后生长素细胞既分裂也分化同时使用分化频率提高4、不同植物激素使用量生长素/细胞分裂素比值结果比值高时促根分化，抑芽形成比值低时促芽分化，抑根形成比值适中促进愈伤组织生长思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？生长素/细胞分裂素高生长素/细胞分裂素低5、pH、温度、光照（菊花组培）pH=5.8温度控制在18—22℃再分化需要光照,每日光照12h6、消毒在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境植物组织培养应用快速繁殖：运用组织培养的途径，一个单株一年可以繁殖几万到几百万个植株，而且均来自一单一的个体，遗传性状一致。例如一株葡萄一年繁殖到3万多株，一株兰花一年繁殖到400万株。种苗脱毒：由于病毒的感染严重影响作物的产量和品质，而利用组织培养技术可以有效地除去植物体内的病毒，得到大量的无病毒种苗。主要的方法是培养植物茎尖