TGXAS-十足目虹彩病毒1检测 荧光定量PCR法编制说明.docx

团体标准《十足目虹彩病毒1检测荧光定量PCR法》

（征求意见稿）编制说明

一、任务来源和起草单位

根据《广西标准化协会关于下达2021年第三十八批团体标准制修订项目计划的通知》（桂标协〔2021〕99号）文件精神，由广西水产科学研究院提出申报的团体标准《十足目虹彩病毒1检测荧光定量PCR法》（项目编号2021-3801）已获立项。该团体标准由广西水产科学研究院提出、由广西水产技术推广站和广西水产科学研究院共同起草。

二、标准制定的目的和意义

2019年3月，国际病毒分类委员会（ICTV）根据虹彩病毒工作组已报道的研究结果，在虹彩病毒科中添加额外的一个属，将其命名为十足目虹彩病毒属(Decapodiridovirus)；虾血细胞虹彩病毒（shrimpiridescentvirus，SHIV）和红螯螯虾虹彩病毒（Cheraxquadricarinatusiridovirus，CQIV）被确认为同一个种的两个病毒株，该病毒种被正式命名为十足目虹彩病毒1(Decapodiridescentvirus1，DIV1)，即DIV1是十足目虹彩病毒属发现的第一个种。DIV1是近年新发现并鉴定的一种新型虹彩病毒，可感染凡纳滨对虾、罗氏沼虾、红螯螯虾、中国对虾等多种经济养殖虾类并可引起大规模死亡，也可感染浮游生物、河虾、鲫、螺蛳以及河蟹等常见水生生物成为传染源传播病毒。DIV1具多种易感宿主的特性使其更易于传播流行，已引起我国多个地区的养殖虾类暴发疫病大批死亡。鉴于DIV1引起的虾虹彩病毒病（DIV1D）的严重危害性，我国从2017年起已将DIV1D纳入《国家水生动物疫病监测计划》，近几年监测结果显示，我国沿海多省市的监测样品检出阳性，检出品种包括凡纳滨对虾、罗氏沼虾、中国对虾、红螯螯虾和克氏原螯虾等我国主要养殖虾品种，表明DIV1已成为中国虾类养殖业面临的新威胁。因此，建立一种快速且准确的DIV1定量检测方法，应用于虾苗检疫、亲虾筛选及成虾养殖疫情监测，为DIV1更敏感、高效检测提供技术参考标准。

目前国际动物卫生组织(OIE)和国内均没有TaqMan-MGB荧光定量PCR检测十足目虹彩病毒的相关标准发布。荧光定量PCR是在PCR反应体系中加入荧光标记物，利用仪器通过荧光强度的检测对PCR扩增产物进行定量，其检测和分析过程在密闭的单管里由机器自动完成，可克服目前农业农村部在DIV1D监测计划中推荐采用的套式PCR法操作繁琐、检测时间长、不可定量等缺点，并以其速度快、灵敏度高、特异性强、自动化程度高、能定量检测病原体感染的强弱等优点而被广泛应用于病原体检测，被认为是实验室检测病原体最理想的方法；而TaqMan-MGB探针则是荧光定量PCR使用的一种荧光探针，其3′端的淬灭基团为不发光的MGB(MinorGrooveBinder)结合物，可实现高Tm值的探针长度缩短易于与模板退火而利于提高方法的灵敏度，且探针3′端不发光的淬灭基团与5′端报告基团在空间的位置更接近，使荧光本底降低、实验结果分辨率更高，因此TaqMan-MGB探针凭借其技术优势在人及动植物各种病原体的定量检测中得到了广泛应用。TaqMan-MGB探针荧光定量PCR不仅能发挥荧光定量PCR的优势而克服套式PCR的缺点，其探针的MGB基团相对于TaqMan探针还有利于提高方法的灵敏度，非常适用于对灵敏度要求高的病原体定量检测。鉴于此，非常有必要将荧光定量PCR纳入DIV1的检测标准中，对有效防控DIV1引起的病毒病具有重要意义。

三、标准的编制过程

1、成立编制工作小组。团体标准《十足目虹彩病毒1检测荧光定量PCR法》项目任务下达后，广西水产科学研究院会同广西水产技术推广站成立了此标准编制工作组，制订了编制总体工作方案及进度安排，确定了标准中主要内容草案，明确了任务分工及工作技术路线。

2、资料收集、方法建立。确定编制工作小组后即展开调查研究，收集资料，包括国内、区内已颁布的相关标准、国内公开发表的相关技术性资料。查阅是否有相关的荧光定量PCR方法应用于虾十足目虹彩病毒1的检测，经综合分析研判，编制人员根据分工，采购试剂、设计引物探针、结合项目组开展的相关科研和检测工作基础，广泛从虾场收集十足目虹彩病毒1病原，初步建立十足目虹彩病毒1荧光定量PCR方法。

3、优化方法，形成征求意见稿。标准起草小组成员在前期研究工作以及初步建立的方法上，将试剂浓度、各反应条件进行优化、改进，筛选最佳反应程序，建立标准的荧光定量PCR方法，制定荧光定量PCR检测技术的操作规程，标准起草小组根据国家标准化相关法律、法规要求，参考国内相关文献资料以及技术标准资料进行编写起草标准文稿。经两家起草单位工作人员讨论修改，最终完成《十足目虹彩病毒1检测荧光定量PCR法》团体标准的征