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水果作物的组织培养

第一节草莓的组织培养

一、形态特性和生物学特性草莓为重要的浆果植物，栽培分布很广，其总产量在浆果类中仅次于葡萄，居世界第二位。草莓果实柔软多汁，含丰富的糖、酸、矿物质，维生素等。草莓可鲜食，也可加工成果酱，果酒等。其颜色鲜艳，是良好的配餐食品。

草莓繁殖容易，结果早，收效快。尤其是近年的促成栽培，利用塑料大棚、日光温室，使草莓的成熟期大大缩短，从11月份到次年的6月份，都有新鲜的草莓上市，填补了水果的淡季市场。

1.形态特性草莓属多年生草本植物，植株矮小，呈半平卧丛状生长，须根系，在土壤中分布较浅。草莓的茎呈短缩状，分地上和地下部分，地上短缩茎节间极短，节密集，其上密集轮生叶片，叶腋部位着生腋芽。

地下短缩茎为多年生，是贮藏营养物质的器官，也可发育成不定根。匍匐茎是草莓的特殊地上茎，是其营养繁殖器官，茎细，节间长，一般座果后期发生。叶属于基生三出复叶，呈螺旋状排列，在当年生新茎上总叶柄部与新茎连接部分，有两片托叶顶端膨大，圆锥形且肉质化。

离生雄蕊20~35枚。雌蕊离生，呈螺旋状排列在花托上，数目从60~600不等。花序为二歧聚伞花序至多歧聚伞花序。果实为假果，主要是花托膨大肉质化形成，瘦果以聚合果形成生于花托上。果实成熟时果肉红色，粉红色或白色。

2.生物学习性草莓根系在土壤温度达到2℃时开始活动，在10℃时开始形成新根，根系生长的最适温度为15~20℃，秋季温度降低到7~8℃时生长减弱。春季气温达5℃时植株开始萌芽，茎叶开始生长。草莓的根系分布较浅，加上植株矮小，叶片较大，因此蒸发量大。在整个生长季节，叶片几乎都在不断地进行老叶死亡、新叶发生的过程，叶片更新频繁。

草莓是喜光植物但又比较耐阴。光照充足，植物生长旺盛，叶片颜色深，花芽发育好，能获得较高的产量。相反光照不良，植株生长势弱，叶柄及花序柄细。叶片色浅，花朵小，果实小，着色不良。

这些特点，决定了草莓对水分要求较高，但在不同的生长发育时期，对水分的要求不同。开花期土壤的含水量应不低于最大田间持水量的70%。果实膨大及成熟期土壤含水量应不低于80%，而秋季9，10月份，土壤持水量达60%即可，草莓不耐涝，要求土壤既有充足的水分供应，又要有良好的通气条件。草莓对土壤适应性强，在各种土壤上都能生长。但由于是浅根性作物，要求肥沃、疏松、透水、通气的中性微酸性或微碱性土壤。

二、草莓脱毒苗的培养1.热处理脱毒将草莓植株在40~41℃温度下处理4~6周，然后取微茎尖培养。

2.微茎尖脱毒(1)初代培养：下午取草莓匍匐茎上的顶芽，用自来水流水冲洗2~4h，然后剥去外层叶片，在无菌条件下，用0.5%次氯酸钠溶液表面消毒5min，并不停地搅动促进药液的渗透。在无菌条件和解剖显微镜下剥取茎尖分生组织，以带有一个叶原基的茎尖为度。0.2mm的茎尖无病毒率可达到100%，但接种后的成活率下降，并延长培养时间。

茎尖分离后，迅速接入MS+BA0.25+NAA0.25或MS+BA0.5+NAA0.2培养基中。培养条件为22~25℃，光照16~18h，3000lx。经2~3个月的培养，可生长分化出芽丛。注意在低温和短日照下，茎尖有可能进入休眠，所以较高的温度和充足的光照时间必须保证。

(2)继代培养把芽丛割成芽丛小块，转入MS+BA0.5+NAA0.01培养基中,待苗长大到1~2cm时，可将芽丛小块分成单株，再转入前述的分化培养基中，又会重复上述过程，达到扩大繁殖的目的。

(3)生根培养1/2MS+IBA0.1生根。(4)驯化：用镊子把草莓苗从试管瓶中取出，洗掉根系附带琼脂培养基。事先备好8×8cm或6×6cm的塑料营养钵，内装等量的腐殖土和河砂。栽前压实，浇透水，用竹签在钵中央打一小孔，将试管苗插入其中，压实苗基部周围基质，栽后轻浇薄水，以利幼苗基部和基质密合。要“深栽浅埋”，即根要深栽、根茎略高于地面。

栽后的试管苗要培养在湿度较大的空间内，一般加设小拱棚保湿，并经常浇水，以增加棚内湿度，以见到塑料薄膜内表面分布均匀的小水珠为宜。约过7~10d后。当检查有一定的根系生出，可逐渐降低湿度和土壤含水量，进入正常幼苗的生长发育管理阶段。

3．花药培养花药培养操作简单，因经愈伤组织途径，再分化得到的即为无病毒苗，所以可免去病毒鉴定工作。

（1）取材与培养取花粉发育单核期的花蕾，置于洁净培养皿中，内放一层滤纸，滴蒸馏水数滴保湿。将处理放入3~4℃冰箱中低温保存3~4d。经预处理的花蕾先在70%酒精中浸泡半分钟，取出放入新配制的饱和漂白粉上清液中消毒10min，用无菌水冲洗3次。然后在超净工作台上剥取花药，立即接种。花粉发育时期可采用醋酸洋红压片鉴定。

培养基为MS+2，4-D0.4+IAA2。去分化阶段培养条件为24~26℃，10h/