细胞培养的设备和操作技术.ppt

培养条件?光照:光照强度、光质、光照时间?温度?湿度?pH值：5.5～6.5?渗透压?通气条件根据离体培养的营养需求，培养基至少包括：?有机化合物；?无机盐；?生长调节剂三、培养基及其配制无机营养物质?、大量元素：C、H、O?、微量元素：Fe、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl、BN、P、K、Ca、Mg、S、(Na)010302培养基的基本成分?一是组成各种化合物，参与机体的建造，成为结构物质；?二是构成一些特殊的生理活性物质，如植物激素、酶以及酶的活化剂，参与植物的代谢活动；?三是这些元素之间相互协调，以维持离子浓度平衡、胶体稳定、电荷平衡等生物电化学方面的作用；?四是在发育过程中，影响组织器官的建成。02010304无机盐的作用：种类：蔗糖、葡萄糖麦芽糖、果糖等多糖：可溶性淀粉作用：浓度：2%-3%?糖：维持培养基合适的渗透压为细胞提供合成新物质的碳骨架为细胞的呼吸代谢提供底物和能量2有机物质?维生素：硫胺素(VB1)、烟酸（VB3又称VBPP）、泛酸(VB5)、吡哆醇(VB6)、酸铵、钴胺素(VB12)、叶酸(VM又称VB11)、抗坏血酸(VC)等等.01作用：利于细胞代谢和器官分化。B1是植物组培必须加入的维生素，其用量在0.1-30mg/L之间，当组培中细胞分裂素特别少时，B1更为需要；烟酸和B6可促进细胞生长02?氨基酸：甘氨酸、精氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等等。因培养基的种类不同，其添加种类和浓度不同。1?肌醇：又称环己六醇，促进糖类的相互转化，维生素、激素的利用作用，使培养物快速生长。2?腺嘌呤、硫酸盐等激素：加入培养基时，可促进芽、根的形成和生长。根据培养基的植物不同，决定是否添加。3?活性炭:主要目的是利用其吸附能力，减少一些有害物质的影响，如可以防止酚类物质污染而引起组织褐化死亡。这类物质为非植物细胞生长所必须，但对细胞生长有利,主要包括琼脂和活性炭。?琼脂:是从海藻中提取的一种高分子碳水化合物，其主要作用是使培养基在常温下凝固，但不参与代谢。3、附加物?作用：提供一些必要的微量营养成分、生理活性物质和生长激素等。?这类物质常指天然提取物：?麦芽提取物、?椰乳、?鲜果汁、?酵母提取物01其它有益有机添加物或未知复合成分02其它部件：离心机：分离原生质体用；点融合仪：细胞融合用。离体组织和试管苗生长发育的场所，A应为培养物创造适宜的温、光、气等条件。B?设计要求C培养室内要求内壁保温、光滑、室顶高2.6m左右，易于控制温、湿度，窗上要求装双层密封玻璃窗，室内有足够电源。D?作用空调机：冷暖型01加热器02定时装置：控制光照时间03培养架：放置培养瓶04摇床和转床：悬浮培养05各种光质灯管：光照培养06温度计：控制温度07遮光帘：供暗培养之用08?设备01辅助实验室：02?细胞学实验室03?摄影室及暗室04?生化分析室各种显微镜，显微照相设备，切片、制片仪器设备，染色用具，暗房设备等。?主要设备植物组织和细胞培养过程中，需随时观察记录其细胞学和形态解剖学的变化，故要设置细胞显微观察室。?作用细胞学实验室01.?基本设备：冰箱、天平、酸度计02.?灭菌设备：蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。03.?无菌操作设备：净化工作台、接种箱细胞工程实验室基本设备配制小结?光温控制设备：时间程序控制器、空调及温度感应器。01?细胞培养设备：培养设备根据需要而定，包括培养架、培养箱、摇床、生物反应器等。02?细胞学鉴定设备：光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜03第二部分基本操作技术基本操作技术主要是围绕无菌操作技术展开的一系列操作技能，内容主要包括：洗涤技术灭菌、消毒技术接种技术2019?、洗涤目的：去除杂物，降低带菌量012020?、根据洗涤对象的不同，主要分为：022021器皿洗涤（包括玻璃、塑料、搪瓷、032022不锈钢器皿）04培养材料洗涤一、洗涤技术01根据洗涤对象的具体情况可分为以下三种：02特殊洗涤03微生物大量污染的洗涤04常规洗涤（一）器皿洗涤自来水洗去油渍、霉菌等脏物；01温肥皂水中浸泡一定时间后用刷子刷净；02自来水冲洗干净，至瓶壁不挂水珠为止；03蒸馏水淋洗内外壁04将玻璃器皿倒置：晾干或烘干（50～75℃）05放入