酶的分子修饰backgrou.ppt

粒细胞集落刺激因子（G-CSF）01用于治疗中性粒细胞减少症02美国Amgen公司研制的PEG修饰长效G-CSF，是在重组人G-CSF的N端Met残基上共价结合了20kD的PEG，于2002年1月获FDA批准03天然SOD与修饰SOD在血浆中的半衰期酶半衰期天然SOD6min右旋糖苷－SOD7hrFicoll（低分子量）－SOD14hrFicoll（高分子量）－SOD24hrPEG－SOD35hrCharacterizationofthePEGylatedproteins.(A)SDS–PAGEcharacterizationofPEGylatedhumanPAH,MOLECULARTHERAPYVol.9,No.1,January2004，124－129Lysozyme–Poly(PEGMA)NHSConjugation+DMSO/NEt314.421.531.045.066.2kDaLysozyme(reference)Bioconjugate5-7polymericchainsattachedProteinMarkers15%CrosslinkedGelSDS-PAGELysozyme–Poly(PEGMA)NHSConjugationColumn:BioSepSEC-S3000Flowrate:0.5mL/minMobilePhase:0.1%TFA(v/v)solutioninH20/MeCN(69/31)UVdetection@215nm主要用于侧链基团的修饰羧基的修饰碳二亚胺2.3.小分子修饰三硝基苯磺酸（TNBS）与Lys反应在420nm和367nm能产生特定的光吸收磷酸吡哆醛（PLP）Lys的专一性修饰剂，325nm有最大吸收，可用于定量氨基的修饰主要对Lys的ε–氨基chemicalcrosslinkingofsidechainsActivatedPolymersConjugationtoamines

(N-terminalamineandlysineresidues)Arg胍基的修饰丁二酮、1,2-环己二酮、苯乙二醛等具有两个临位羰基的试剂巯基的修饰主要是烷基化试剂和还原剂碘乙酸马来酰亚胺对氯汞苯甲酸DTT巯基乙醇ConjugationtocysteineresiduesHis咪唑的修饰焦碳酸二乙酯Trp吲哚基的修饰Trp一般位于分子内部，反应性差N-溴代琥珀酰亚胺4-硝基苯硫氯胰凝乳蛋白酶上羧基经碳二亚胺活化后，可与一系列二胺作用。结果发现，用1,4—二氨基丁烷交联该酶，可得到稳定性有所改善的酶制剂1酶分子内部两个侧链基团反应，增加酶分子表面交联键的数目是稳定酶的方法之一。22.4.分子内交联Clain和Navia首次证实了利用交联酶晶体(Crosslinkedenzymecrystal,CLEC)技术提高了嗜热菌蛋白酶的生物活性,增加了其热稳定性。ThepreparationofCLCsofthesemisyntheticperoxidaseseleno-subtilisin.(a)Batchcrystallisationin12%(w/v)Na2SO4at16–18°Cwasfollowedbytreatment(45min)withglutardialdehydeatpH7.5.(b)1hin0.11MphenylmethanesulfonylfluorideatpH7.0.(c)Additionofaqueoussodiumhydrogenselenidesolutionwasfollowedby45hstirringat45°C.(d)30minin10mMH2O2.Enz,enzyme;Enz-OH,Ser221ofsubtilisin;Enz-NH2,lysineresiduesonthesurfaceoftheenzyme;Ph,phenyl.CurrentOpinioninChemicalBiology1999,3:35–38枯草杆菌蛋白酶经预处理,冻干形成交联酶晶体,在有机溶剂和水溶液中的稳定性大大增加,活力可提