细菌常用的几种试验.ppt

临床细菌检验常用的几种试验菏泽市立医院常做的实验方法革兰氏染色法拉丝试验抗酸染色法氧化酶试验触酶试验凝固酶试验奥普妥辛实验卫星实验CAMP杆菌肽敏感实验硝酸盐还原试验DNA酶试验生化反应血清学分型(志贺,沙门，霍乱、链球菌)革兰氏染色快速染色法：媒染：革兰氏碘液染色10秒，水洗，甩干；02初染：结晶紫染色10秒，水洗，甩干；01结果判定：G+呈紫色，G-菌呈红色05脱色：95%酒精脱色10~20秒，水洗，甩干；03复染：沙黄或复红染色10秒，水洗，干后镜检。04氢氧化钾拉丝试验“氢氧化钾拉丝试验”快速鉴定革兰氏阳性菌原理：由于革兰阴性细菌的细胞壁肽聚糖层数少于稀碱溶液内易于破裂，而释放出未断裂的DNA螺旋，使KOH菌悬液呈现粘性，可有搅拌后拉出丝来，而革兰阳性菌在稀碱溶液中仍保持不变。试剂：4%KOH水溶液。应新鲜配制。12345结果：能用接种环拉出丝来为阳性，仍为混悬液则为阴性。大多数革兰阴性菌于5到10秒内出现阳性，有的需30到45秒。革兰阳性菌于60秒以后仍阴性。方法：取1滴4%KOH水溶液于洁净玻片上，用接种环于固体培养基上取新鲜配制菌落少许，于KOH溶液中搅拌混匀，并每隔几秒钟上提接种环，观察能否拉出丝来。抗酸染色1初染：石炭酸复红加热染色3-5分钟，水洗，甩干；2脱色：3%盐酸酒精脱色30~60秒，水洗，甩干；5意义：用于鉴别抗酸菌与非抗酸菌4结果判定：抗酸菌呈红色，非抗酸菌呈兰色3复染：碱性美兰60秒，水洗，干后镜检。氧化酶试验原理：具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C氧化，再由氧化型细胞色素C使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化合物。方法：取一洁净的滤纸一小块，涂抹菌苔少许，加一滴氧化酶试剂（对苯二胺溶液）于菌上，观察颜色变化。判断：立即呈粉红色并迅速转变为紫红色为阳性，不变色为阴性。意义：肠杆菌科细菌与气单胞、假单胞菌的鉴别触酶试验原理：具有触酶（过氧化氢酶）的细菌，能催化过氧化氢，放出新生态氧，继而形成分子氧，出现气泡。01方法：用接种环挑取固体培养基上的菌落置于洁净的玻片上，然后滴加3%过氧化氢溶液一滴，观察结果。02结果判断：在5秒内释放大量的气泡为阳性。03意义：大多数球菌触酶试验阳性，但链球菌为阴性，主要用于鉴别葡萄球菌与链球菌。041.原理：金黄色葡萄球菌可产生两种凝固酶。一种是结合凝固酶，结合在细胞壁上，使血浆中纤维蛋白原变成纤维蛋白附着于细菌表面上，发生凝集，用玻片法测出。另一种是菌体生成后释放与培养基中的游离凝固酶，能使凝固酶原变成凝血酶类物质，从而使血浆凝固，可用试管法测出。2.方法：（1）玻片法：取血浆和生理盐水各一滴分别滴到清洁玻片上，挑去待检菌落分别与血浆及盐水混合，如血浆中出现明显凝集颗粒而盐水中无自凝现象者为阳性。（2）试管法：取试管两支，分别加入0.5ml的血浆（经生理盐水1：4稀释）挑去菌落数个加入测定管充分研磨混匀，用一只阳性菌株加入对照管，37℃3-4小时。血浆凝固者为阳性。奥普妥辛实验

（OP试验）原理：肺炎链球菌对Optochin（乙基氢化去甲奎宁）十分敏感，作用机理是干扰肺炎链球菌叶酸的合成，可抑制其生长，其他链球菌如草绿色链球菌对其不敏感。借此可对肺炎链球菌与草绿色链球菌加以鉴别。01方法：将待检的a溶血的链球菌均匀的涂布于血平板上，贴放Optochin纸片（含药5mg)35℃孵育18-24小时，观察抑菌圈的大小。02结果判断：抑菌圈〉14mm为肺炎链球菌，无或见很窄的抑菌圈为草绿色链球菌。031.原理：流感嗜血杆菌生长时需要X、V两种因子，在血平板上形成极小、圆形透明的菌落，若与金葡菌同时培养，由于金葡菌产生V因子，促进流感嗜血杆菌的生长，在金葡菌周围的细菌菌落较大，形成卫星生长现象。在普通培养基上不生长。2.方法：用取菌环挑去可疑菌落分别接种在血平板、MH平板上，再用取菌针挑取金葡菌与原划线垂直划一直线接种在平板上。35℃24小时观察结果。3.结果判断：金葡菌周围的细菌菌落较大，卫星试验阳性4.意义：仅血平板上出现卫星现象--流感嗜血杆菌；血平板与MH均呈卫星现象--副流感嗜血杆菌。借此用于鉴别流感与副流感嗜血杆菌。CAMP试验原理：B群链球菌在血平板上能产生CAMP因子，可促使金黄色葡萄球菌β溶血素的活性，故在血平板上两种细菌交界处溶血能力增强，形成箭头状透明状溶血区。其他链球菌一般不产生CAMP因子，故此试验可作为B群链球菌的鉴定指标之一。方法：在血