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弗林蛋白酶抑制剂对肺腺癌细胞生长和转移的影响研究方法--第1页

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN103743909A

(43)申请公布日2014.04.23

(21)申请号CN201310653721.8

(22)申请日2013.11.29

(71)申请人漯河医学高等专科学校

地址462002河南省漯河市大学路148号漯河医学高等专科学校医疗系

(72)发明人徐松涛马永超刘晓东范文娟郭小慧吴华李飞

(74)专利代理机构

代理人

(51)Int.CI

G01N33/68

G01N33/53

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

弗林蛋白酶抑制剂对肺腺癌细胞生

长和转移的影响研究方法

(57)摘要

本发明涉及一种弗林蛋白酶抑制剂

对肺腺癌A549细胞生长和转移的影响研

究方法，具体包括以下步骤：(1)MTT法检

测细胞的增殖；(2)A549细胞克隆形成能力

检测；(3)Hochest33342／PI双染法检测细

胞凋亡；(4)单层细胞迁移实验(wound

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healing)；(5)Transwell侵袭实验；

(6)Westernblot检测细胞迁移相关蛋白表达

水平；(7)酶联免疫吸附试验；(8)统计分

析。本发明通过研究弗林蛋白酶抑制剂对

肺腺癌A549细胞生长和转移的影响，可

以更好地利用Furin抑制剂a1-PDX抑制

Furin在肺腺癌A549细胞中表达，从而有

效地为癌症治疗提供依据。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

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权利要求说明书

1.一种弗林蛋白酶抑制剂对肺腺癌A549细胞生长和转移的影响研究方法，其特征

在于：具体包括以下步骤：

(1)MTT法检测细胞的增殖：对数生长期A549细胞接种到96孔板中(每孔5×

103)，24h后开始加入不同浓度的a1-PDX(200nM、400nM)继续培养

24h-96h；每孔加入20μlMTT试剂(5毫克／毫升)溶液，并于

37℃温育4小时；每孔加入150μL的DMSO溶解甲臜晶体，震

荡溶解后检测490nm处的光密度；

(2)A549细胞克隆形成能力检测：取对数生长期的单层培养细胞，用0.25％胰蛋

白酶消化吹打成单个细胞，把细胞悬浮在含10％胎牛血清的1640培

养液中，以1×103／ml的细胞密度接种于培养皿中；加入不同浓

度的a1-PDX(200nM、400nM