细胞工程基本技术.pptVIP

紫外灯超净工作台培养架光照培养箱摇床生物反应器1生物反应器2植物细胞培养反应器显微镜无菌技术无菌技术是一个技术体系，涉及多方面因素、多个环节，只有诸因素和环节都处理好，才能达到无菌。培养基器皿材料接种工具操作环境培养室工作台面具体的灭菌方法有多种污染检测与控制玻璃器皿清洗浸泡——刷洗——浸酸——冲洗常用器械01无菌操作室和无菌培养室02要求：墙壁光滑、地面平坦无缝，门窗密闭，无空气对流无菌室培养室1培养室2工作台面04030102物理灭菌：高温高压灭菌、干热灭菌、射线辐照灭菌、过滤灭菌化学灭菌：熏蒸灭菌、消毒液灭菌（酒精、升汞、漂白粉、新洁尔灭、次氯酸钠、次氯酸钙、过氧化氢）抗生素消毒：在动物细胞培养中，常采用青霉素、链霉素、卡那霉素、制霉菌素等抗生素抑制细菌、真菌等污染。根据灭菌对象选择不同的灭菌方法灭菌种类原理：在121℃高温和0.8kg/cm2-1.1kg/cm2的压力下，一般持续15-20分钟后，就可杀死一切微生物的营养体及其孢子。适用于器皿、工具、衣物和培养基灭菌。高温高压灭菌01.将物品放入烘箱，利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固而达到灭菌的目的。02.适用于玻璃器皿。干热灭菌法烘箱射线灭菌紫外光常用于培养室和接种箱或超净台的灭菌。操作前开灯20分钟可达到灭菌效果。010203原理：将带菌的液体或气体通过孔径小于0.45uM微孔装置，使杂菌留在滤板上而液体或气体进入无菌空瓶中，从而达到除菌目的。常用于不能以高温高压灭菌的培养液、有机物质溶液和酶液的除菌。组织培养中常用的过滤除菌器是滤膜过滤器，它清洗方便，过滤效果好。过滤灭菌形态观察:01生化分析:锚定蛋白:检测凋亡早期PI:检测晚期或死细胞01分子技术:梯形电泳图谱01凋亡细胞观察PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面FITC-AnnexinV染色FITC-AnnexinV和PI染色梯形电泳图谱样品处理:秋水仙素固定化染色观察低渗处理染色体分析软琼脂培养法和有限稀释法显微操作分离法流式细胞仪分离激光捕获显微切割免疫磁珠分离单个细胞的获得细胞初步分离差速离心分离法细胞分离预保留细胞经消化分散后，加入冷冻保护液，同时将细胞悬液稀释按1ml/安瓿分装细胞悬液，在火焰下将安瓿封口。将封口的安瓿放入慢冻机内，按1℃/min的速度缓慢冷冻，使温度降至-25℃冻结好的安瓿放入CO2低温冰柜或液氮罐中，温度达-150—--190℃如果需要复苏，可将安瓿取出后立即放入37℃水浴中，使其快速融化32145目前广泛应用的细胞保存方法是低温冷冻保存法细胞保存与复苏植物组织培养的基本实验室有哪些？实验室布局的基本要求是什么？01消毒灭菌种类有哪几类？02使用高压锅的基本步骤是什么？03用血球计数板进行计数时，细胞数/L=N*25/5*10*10^6*稀释倍数，N指什么？04对细胞进行染色体分析中，样品处理时加秋水仙素起什么作用？05简述细胞低温冷冻保存的方法06思考题第三章、细胞工程基本技术实验室条件无菌技术显微技术细胞观察与分析细胞分离细胞保存与复苏基本技术实验用品及主要设备02实验室基本组成01实验室条件控制培养。03无菌操作；02实验准备，包括培养基配制，洗涤与灭菌等；01细胞工程实验室它必须满足三个基本的需要，即：实验室基本组成准备室：准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作。要求宽敞明亮，通风条件好。接种室：接种室的功能是进行无菌操作。要求封闭性好，干燥清洁，能较长时间保持无菌。房间一般不宜过大，其规模根据实验需要而定。接种室除了出入口和通气口外，应行密闭。培养室：培养室的功能是对离体材料进行控制培养。其首要要求是要能控制光照和温度，其次为防止微生物感染，培养室应保持干燥和清洁。010203基本实验室030201细胞学实验室：其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。要求清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。摄影室及暗室：其功能是进行培养材料的摄影记录和胶片冲印。在有条件的情况下可建立此实验室。生化分析室：在以培养细胞产物为主要目