双光子和光谱在激光共聚焦显微镜上的应用经验ppt课件.pptxVIP

双光子和光谱扫描在激光共聚焦显微镜上的应用经验

浙江大学生命科学学院

仪器与技术服务平台

机型：ZeissLSM710nlo

32通道阵列PMT

690-1080nm可调谐飞秒激光器

激光共聚焦显微镜的非常规应用

利用双光子分辨目标荧光和自发荧光

利用光谱扫描鉴定微弱荧光信号的真假

转基因材料快速筛选

嘈杂背景下的细胞计数

非线性效应

光刻和深度扫描

模拟近红外光源

GFP标记水稻根中自发荧光的清除

单光子激发，水稻根带有强烈的黄绿色自发荧光

双光子激发，自发荧光为蓝色

ex488nm，Lambdamode

ex820nm,lambdamode

GFP标记水稻根中自发荧光的清除

双光子激发下GFP荧光与自发荧光的波长分离，820nm激发时，仅采集493-542nm区间的信号以保证特异性

Ex820nm,channelmode

微弱或自发荧光存在下的信号鉴定

Promoter::GFP载体注射烟草叶片（lambdamode成像）

转GFP弱表达

转GFP不表达

镜下目视特征：

绿色信号被强烈红光掩盖

GFP和RFP弱时无法分辨

Lambda合成图特征：

GFP：绿色偏蓝

自发荧光：绿色偏黄

叶绿素荧光：红色

光谱特征：

GFP：

主发射峰位于约518nm

副发射峰位于约540nm

后者高度约为前者的一半

呈台阶形

自发荧光：

在560nm左右对称分布

叶绿素荧光：

625nm以上强烈信号

GFP

叶绿素

非线性效应：碳纳米管

498

518

421

原理：某些材料在双光子激发，会发射波长为激发光一半的荧光

利用不同波长的双光子激光照射可能含碳纳米管的靶向药物，lambda扫描发现荧光信号呈现严格的倍频关系

Ex850

Ex1000

Ex1040

光刻和深度扫描

一种人工合成的透明有机晶体，在一定强度的近紫外光下会发生局部变性，从而具有双光子效应

在2个不同Z坐标下做bleach，ex458nm

ex900nm做z-stack，显示多层光刻效果，信号随深度增加而衰减

叶表面蜡质层成像及厚度测定

菲（多环芳烃类）渗透

Ex700nm

Channelmode

Z-stack

谢谢大家