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超高效液相色谱荧光法测定大豆中黄曲霉毒素B_1含量_户江涛

一、引言

黄曲霉毒素B_1（AflatoxinB_1，AFB_1）是一种常见的真菌毒素，主要来源于粮食作物如玉米、花生、大豆等。其对人体健康具有极大的危害，长期摄入低剂量AFB_1可能导致肝脏疾病，甚至引发癌症。据世界卫生组织（WHO）报告，全球每年因黄曲霉毒素污染导致的癌症病例高达数十万。在我国，AFB_1污染问题也日益严重，尤其是大豆等油料作物的污染情况令人担忧。为了保障食品安全，降低AFB_1对人类健康的潜在风险，建立快速、准确、灵敏的检测方法至关重要。

超高效液相色谱（UHPLC）荧光检测技术因其高效、灵敏、准确等优点，在食品中痕量毒素检测领域得到了广泛应用。近年来，随着分析技术的不断发展，UHPLC荧光检测技术在AFB_1的测定方面取得了显著进展。据报道，UHPLC荧光检测AFB_1的最低检测限可达0.1ng/g，定量限可达1ng/g，能满足食品安全检测的要求。此外，UHPLC荧光检测技术还具有操作简便、样品前处理要求低、检测周期短等优势，为AFB_1的快速检测提供了有力保障。

大豆作为我国重要的粮食和油料作物，其AFB_1含量直接关系到人民群众的饮食安全。据统计，我国大豆年产量约为1.8亿吨，其中约40%用于食用油的生产。然而，近年来大豆种植过程中，由于气候、土壤等因素的影响，AFB_1污染问题愈发严重。为了确保大豆产品的质量安全，相关部门对大豆中AFB_1的检测标准日益严格。在此背景下，本研究旨在建立一种基于UHPLC荧光检测技术的大豆中AFB_1快速检测方法，为我国大豆产品的质量控制提供技术支持。

本研究采用UHPLC荧光检测技术，结合高效液相色谱柱、荧光检测器等设备，对大豆中AFB_1进行定量分析。通过对样品进行适当的预处理，如溶剂提取、净化等，可有效提高检测灵敏度和准确性。此外，本研究还将对UHPLC荧光检测方法进行优化，包括流动相选择、流速控制、柱温设定等，以实现最佳检测效果。通过对比分析不同检测方法的结果，本研究将为大豆中AFB_1的快速检测提供一种可靠、高效的检测手段，为食品安全保障提供有力支持。

二、实验材料与方法

(1)实验材料包括大豆样品、黄曲霉毒素B_1标准品、甲醇、乙腈、磷酸盐缓冲溶液、氨水、无水硫酸钠、C18固相萃取小柱等。大豆样品来源于市场购买的各类大豆产品，黄曲霉毒素B_1标准品购自国家标准物质中心。实验所用试剂均为分析纯，实验用水为超纯水。

(2)样品预处理步骤如下：首先，准确称取适量大豆样品，加入适量甲醇进行超声提取；提取液经离心后，取上清液，加入适量无水硫酸钠脱水；接着，将脱水后的溶液通过C18固相萃取小柱进行净化；最后，将净化后的溶液经氮气吹干，残渣用流动相复溶于适当体积的流动相中，待UHPLC分析。

(3)UHPLC荧光检测方法采用WatersAcquityUPLC系统，配备荧光检测器。流动相为乙腈-水溶液，流速为1.0mL/min，柱温为30℃。黄曲霉毒素B_1的检测波长为365nm，激发波长为435nm。分析柱为WatersACQUITYUPLCBEHC18柱（2.1mm×100mm，1.7μm）。实验过程中，对UHPLC荧光检测参数进行优化，以确保检测结果的准确性和灵敏度。

三、黄曲霉毒素B_1标准溶液的制备与校准

(1)黄曲霉毒素B_1标准溶液的制备首先需准确称取一定量的黄曲霉毒素B_1标准品，通常为1mg，用甲醇溶解并定容至100mL棕色容量瓶中，得到1000ng/mL的储备溶液。该储备溶液需在2-8℃冰箱中保存，避免长时间光照和温度变化对标准品稳定性的影响。在使用前，需将储备溶液用流动相进行稀释，制备成不同浓度的标准溶液，以供校准和定量分析使用。

(2)校准曲线的制备是确保检测方法准确性的关键步骤。首先，取一定量的不同浓度标准溶液，通过UHPLC荧光检测法进行测定，记录各浓度点的荧光强度。然后，以黄曲霉毒素B_1的浓度为横坐标，对应的荧光强度为纵坐标，绘制校准曲线。为确保校准曲线的线性，通常选择至少5个不同浓度的标准溶液进行测定。在绘制校准曲线时，还需考虑荧光强度与浓度的相关性，选择合适的数学模型，如线性回归，以获得最佳的拟合效果。

(3)为了确保实验结果的可靠性，对黄曲霉毒素B_1标准溶液的制备与校准过程进行质量控制。首先，对标准品进行稳定性测试，评估其在不同储存条件下的稳定性。其次，定期对标准溶液进行复现性测试，确保不同批次标准溶液的一致性。此外，对校准曲线进行验证，确保其线性关系良好，无明显的非线性偏差。在实验过程中，还需严格控制操作条件，如流速、柱温、检测波长等，以确保UHPLC荧光检测结果的准确性和重复性。通过这些质量控制措施，可以保证黄曲霉毒素B_1检测方法