高效液相色谱法(HPLC)检测黄曲霉毒素B1的研究发展.docxVIP

PAGE

1-

高效液相色谱法(HPLC)检测黄曲霉毒素B1的研究发展

一、1.黄曲霉毒素B1的概述

(1)黄曲霉毒素B1（AflatoxinB1，AFB1）是一种常见的真菌毒素，主要由曲霉菌属和青霉菌属的某些菌株产生。该毒素具有很强的致癌性，被世界卫生组织国际癌症研究机构（IARC）列为1类致癌物。黄曲霉毒素B1主要污染粮油作物，如玉米、花生、大豆等，以及粮食加工副产品，如玉米粉、花生酱等。据统计，全球每年大约有12%的粮食受到黄曲霉毒素污染，给人类健康带来严重威胁。

(2)黄曲霉毒素B1的化学结构为二呋喃环和香豆素的衍生物，分子量为314.35。它在紫外线照射下呈现蓝色荧光，具有强烈的毒性和致癌性。据研究，黄曲霉毒素B1的致癌活性比二甲基亚硝胺高75倍，比苯并芘高4000倍。长期摄入含有黄曲霉毒素B1的食物，可能导致肝癌、胃癌、肾癌等多种癌症。例如，我国河南省某地区肝癌发病率较高，经研究发现，该地区粮食中黄曲霉毒素B1含量超标是导致肝癌高发的主要原因之一。

(3)黄曲霉毒素B1的检测方法主要包括高效液相色谱法（HPLC）、酶联免疫吸附测定法（ELISA）、薄层色谱法（TLC）等。其中，HPLC因其灵敏度高、准确性强、适用范围广等优点，成为检测黄曲霉毒素B1的主要方法。例如，我国国家标准GB5009.24-2016《食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B1的测定》中明确规定，HPLC法是检测粮食、油料及制品中黄曲霉毒素B1的法定方法。近年来，随着分析技术的不断发展，HPLC检测黄曲霉毒素B1的方法也在不断优化，如采用柱前或柱后衍生化技术、荧光检测器等，以提高检测灵敏度和准确性。

二、2.高效液相色谱法（HPLC）的基本原理及在黄曲霉毒素B1检测中的应用

(1)高效液相色谱法（HPLC）是一种基于液体作为流动相，利用色谱柱中固定相和流动相的相互作用来分离混合物中各组分的分析技术。该方法具有高效、快速、灵敏和自动化程度高等特点。在黄曲霉毒素B1检测中，HPLC通过选择合适的色谱柱和检测器，能够实现对低浓度毒素的准确测定。例如，2017年，我国某实验室采用HPLC-荧光检测器对花生油中黄曲霉毒素B1进行检测，检出限达到0.5ng/g，满足国家标准要求。

(2)HPLC检测黄曲霉毒素B1的主要步骤包括样品前处理、色谱柱分离和检测。样品前处理环节涉及样品提取、净化和浓缩等步骤，目的是去除杂质，提高目标毒素的浓度。常用的提取方法有索氏提取、超声波提取和微波辅助提取等。净化通常采用固相萃取（SPE）或液-液萃取（LLE）等方法。以SPE为例，其操作简便、回收率高，是黄曲霉毒素B1检测中常用的净化技术。检测器方面，荧光检测器因其对黄曲霉毒素B1具有高灵敏度而被广泛应用。

(3)在色谱柱分离过程中，黄曲霉毒素B1与固定相的相互作用程度决定了其在色谱柱中的保留时间。不同类型和规格的色谱柱会影响分离效果。例如，C18色谱柱对黄曲霉毒素B1的分离效果较好，而C8色谱柱则适用于复杂样品的分离。此外，流动相的选择对分离效果也有重要影响。常用的流动相为乙腈-水溶液，其中加入一定比例的醋酸、磷酸等缓冲溶液，以调节pH值，提高分离效率。在实际应用中，通过优化色谱条件，如改变流动相比例、流速和柱温等，可实现黄曲霉毒素B1的准确检测。如2019年，某研究通过优化HPLC条件，将黄曲霉毒素B1的检测限降低至0.2ng/g，显著提高了检测灵敏度。

三、3.HPLC检测黄曲霉毒素B1的技术发展及优化

(1)随着科学技术的不断进步，高效液相色谱法（HPLC）在黄曲霉毒素B1检测中的应用得到了显著发展。其中，柱前和柱后衍生化技术是提高检测灵敏度和选择性的一项重要进展。柱前衍生化通常通过化学修饰将黄曲霉毒素B1转化为易于检测的衍生物，从而增强其荧光信号。例如，采用2,4-二硝基苯肼（DNPH）对黄曲霉毒素B1进行衍生化，可显著提高其检测灵敏度。而柱后衍生化则是在色谱柱流出物进入检测器之前进行，如使用荧光衍生化试剂，可以在不影响分离效率的前提下提高检测灵敏度。

(2)为了进一步提高黄曲霉毒素B1的检测灵敏度，研究人员开发了多种新型色谱柱和检测器。例如，采用键合有特殊官能团的色谱柱，如苯基、氰基或氨基键合相，可以改善分离效果，减少干扰。在检测器方面，除了传统的荧光检测器外，电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）和电喷雾电离质谱（ESI-MS）等高灵敏度检测器也被应用于黄曲霉毒素B1的检测。这些新型检测器能够提供更低的检测限和更高的定量准确度。

(3)此外，自动化和集成化技术在HPLC检测黄曲霉毒素B1中的应用也日益广泛。自动化样品前处理系统，如自动固相萃取（ASE）和自动进样器，能够提高检测效率，减少人为误差。集成化技术则将样品前处理、色谱分离和检测等环节集