质谱技术在临床微生物检验中的应用.ppt

质谱技术在临床微生物检验中的应用

（一）、现代感染性疾病和

临床微生物检测现状耐药菌株增多疑难菌株增多现代感染性疾病新特点条件致病菌增多人员少、鉴定速度较慢感染菌种类增多010302040506

临床微生物当前现状病原生长时间报告时间需氧菌24h2-3个工作日厌氧菌48h酵母菌2-5天2-5个工作日丝状真菌2-5天

0102呼吸道、肠道标本的细菌种类繁多，常规的鉴定成本高或者操作麻烦，容易漏掉或者忽视某些细菌。厌氧菌、弯曲菌、分枝杆菌和真菌：细菌鉴定的死角，技术上不好掌握或者目前的方法难以实施。微生物的分级报告制度：存在很多变数，使得初次报告的结果可靠性得不到临床的认可。（比如：直接涂片，初步能估计细菌大类，但是无法确切的到种，和耐药情况。）实验室要求：操作方便的，成本便宜的，性价比高的，临床迫切需要的。常规微生物检验遇到的困惑：

临床微生物实验室自动化将实验室人员从一些技术要求较低的、能由仪器完成的工作中解脱出来，提高标本处理效率，缩短TAT时间。

临床的需求……

MALDI-TOF革命性安图生物Autofms1000

兽医微生物质谱的应用领域临床微生物食品微生物（食品安全与质控）环境微生物监测

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪MALDI-TOFMS的组成飞行时间质量检测器（TOF）基质辅助激光解吸电离离子源（MALDI）数据库MALDI-TOFMS主机

MALDI-TOFMS的原理基本原理是将样品分散在基质分子中并形成晶体。当用激光照射晶体时，基质从激光中吸收能量，样品解吸附，基质-样品之间发生电荷转移使得样品分子电离，电离的样品在电场作用下飞过真空的飞行管，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测，即通过离子的质量电荷之比（M/Z）与离子的飞行时间成正比来分析离子，从而测得并绘出样品分子的质谱图。

蛋白质是生命的物质基础。不同的细菌或不同疾病的样品，其蛋白质的种类和含量不同。不同的蛋白质解析后形成的多肽片段的种类、数量和分子量也不一样，因而在一定的条件下，在电离空间的运动速度和距离不同。用质谱仪将各种蛋白质解析后在电离空间的运动速度和距离的轨迹记录和描绘下来，则会形成不同的曲线图形。

（四）、操作简便

基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱样品靶板01细菌与基质02飞行管03检测器04质谱图05真空系统06样品靶板入口07几秒钟即可得到结果08(MALDI-TOFMS)09

MALDI-TOFMS蛋白质指纹特征

质谱检测流程MALDITOF检测挑取部分菌落点样至靶板加基质液生成图谱搜库鉴定

STEP01STEP02鉴定结果显示绿色并且分数最高的为该样品的鉴定结果。

Bruker的结果报告：得分范围分数的解释2.300-3.000highlyprobablespeciesidentification完全可靠地鉴定到种的水平2.000-2.299securegenusidentification,probablespeciesidentification可靠鉴定到属的水平，有可能鉴定到种的水平1.700-1.999probablegenusidentification 有可能鉴定到属的水平0.000-1.699noreliableidentification 没有可信的鉴定结果AnalyteNameOrganism(bestmatch)ScoreOrganism(secondbestmatch)ScoreSample1Pseudomonasaeruginosa199551CHB1.906PseudomonasaeruginosaDSM1117DSM1.881Sample2ProteusmirabilisDSM18254DSM1.774noreliableidentification1.631Sample3Klebsiellapneumoniaessppneumoniae92951CHB2.064KlebsiellapneumoniaessppneumoniaeDSM30104THAM1.994Sample4EnterobactercloacaeMB11506-1_CHB2.299Enterobactercloacae13159_1CHB2.072优点：直接可以打印缺点：目前没有做接口连接到实验室的LIS系统

与现有传统的鉴定诊断技术相比，具有操作简单、快速、通量高、灵敏度高、准确度好、试剂耗品非常经济等优势。对临床的意义：分级报告，缩短了TAT时间，尤其是厌氧菌、奴卡菌等非常难鉴定的菌提供巨大的帮助。准确度时间成本MALDI-TOF90%5min2元常规方法80%5~48h50元

五、实