《临床免疫测定技术》课件.pptVIP

*******************临床免疫测定技术临床免疫测定技术是医疗诊断中的重要手段之一。它利用抗原-抗体反应原理对生物体内的各种物质进行定性和定量分析,为临床提供准确可靠的检测结果。课程简介和学习目标课程简介本课程将全面介绍临床免疫测定技术的原理和应用。涵盖免疫测定技术的发展历程、基本原理、分类和特点等。学习目标通过学习本课程,学生将掌握免疫测定技术的基础知识,了解常见免疫测定方法的特点和应用,并能够正确解释检测结果。课程内容本课程涵盖免疫测定技术的原理、方法、实践应用,以及未来发展趋势等多个方面。免疫测定技术发展简史11900年代拉德策基发现了抗原-抗体反应的基本原理。21950年代放射性免疫测定法(RIA)首次被应用于临床实验。31970年代酶联免疫吸附测定法(ELISA)开始应用于临床诊断。41990年代化学发光免疫测定法(CLIA)和荧光免疫测定法(FIA)广泛应用。免疫测定技术经历了近一个多世纪的发展历程,从最初的基本理论研究,到逐步应用于临床诊断和病情监测。随着各种新技术的不断涌现,免疫测定技术的灵敏度、精确度和自动化水平不断提高,使其成为临床检验和医学研究不可或缺的重要工具。免疫测定的基本原理1抗原抗体特异性识别免疫测定技术依赖于抗原与特异性抗体之间高度特异性的识别和结合。2免疫复合物形成抗原与抗体结合后会形成免疫复合物,这是免疫测定的基础反应。3定量化测量通过测量免疫复合物中一种成分的信号强度,可以定量测定另一种成分的浓度。4检测信号放大利用酶、放射性元素或化学发光物等标记可以放大检测信号,提高灵敏度。免疫测定的分类和特点分类免疫测定方法分为同种异型和异种异型两大类,包括放射性免疫测定法(RIA)、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、化学发光免疫测定法(CLIA)等。特点免疫测定具有高特异性、高灵敏度、简便快速等优点,广泛应用于疾病诊断、药物检测、过敏反应评估等领域。自动化现代免疫测定技术发展至可实现全自动化操作,大大提高了检测效率和精准度。抗原和抗体的性质及特点抗原特点抗原是能引起机体产生特异性免疫应答的物质,通常为细菌、病毒、多肽等大分子。抗原具有免疫原性、特异性和多样性等特点,能激发机体产生特异性抗体。抗体特点抗体是由B细胞产生的Y型蛋白质,能特异性地结合相应的抗原。抗体具有亲和力、特异性以及多样性等特点,能发挥中和、凝集、补体激活等多种功能。抗原抗体反应动力学动力学过程抗原抗体反应是一个动力学过程,包括结合、形成免疫复合物以及最终解离的过程。结合常数结合常数反映了抗原与抗体结合的亲和力大小,是描述反应动力学的重要参数。平衡状态反应达到平衡时,正向和逆向反应速率相等,结合和解离达到平衡。影响因素温度、pH值、离子浓度等因素都会影响抗原抗体反应的动力学过程。免疫测定系统的组成分析仪器免疫测定需依赖高精度的分析仪器,如酶标仪、化学发光仪等,能自动化完成反应、检测及数据处理。测定试剂包括抗原、抗体、标记物、反应缓冲液等,这些试剂的品质直接影响测定结果的准确性。操作环境免疫测定要求无尘、无菌的操作环境,实验室设备如离心机、洗板机等也是必需的。抗原和抗体的标记技术同位素标记使用放射性同位素如131I、125I等对抗原或抗体进行标记,可用于放射性免疫测定法(RIA)。酶标记将酶如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等共价结合到抗原或抗体上,可用于酶联免疫吸附测定法(ELISA)。荧光标记利用荧光染料如FITC、罗丹明等与抗原或抗体结合,可用于荧光免疫测定法(FIA)。化学发光标记将发光基团如亮氨酸酯标记到抗原或抗体上,可用于化学发光免疫测定法(CLIA)。免疫检测样本的处理1样本采集为确保检测结果准确可靠，样本采集是关键。需按标准操作规程采集合适的生物样本，如血液、尿液等。2样本处理根据不同检测方法，样本可能需要离心分离、溶解、稀释等处理。确保样本充分溶解均匀，去除干扰因素。3样本保存免疫检测样本应按标准条件保存，如低温冷藏。保存时间和条件会影响检测结果，需严格控制。酶联免疫吸附测定法(ELISA)微量化原理利用酶-底物发色反应放大检测信号,微量化样本和试剂的用量。抗原抗体反应利用高特异性的抗原-抗体反应作为基础,实现快速准确定量。光学检测原理采用分光光度法或荧光法进行灵敏度高、重复性好的定量检测。放射性免疫测定法(RIA)1放射性同位素标记利用125I等放射性同位素标记抗原或抗体,测定时通过检测标记物的放射性强度来定量分析目标分子。2高灵敏度RIA技术具有极高的灵敏度,可检测极微量