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C57BL/6小鼠苍白球铁沉积诱发运动障碍的机制研究

摘要

目的：

Parkinson’sdiseasePDSubstantianigraSN

帕金森病（，）是由中脑黑质（，）多

巴胺能神经元变性死亡引起的一种中老年人常见的神经退行性疾病。主要表现为运

动迟缓、肌强直、姿势步态异常等运动症状以及睡眠障碍、情绪障碍等非运动症状。

苍白球铁沉积是PD临床影像学特征之一，PD患者苍白球铁含量要高于正常人，

PD

并且苍白球铁沉积是较晚的疾病特征，但目前尚无研究探讨苍白球铁沉积在疾

病进程中的作用。目前并没有研究报道在经典的PD模型中存在着苍白球铁沉积现

象，所以本研究拟选用C57BL/6小鼠建立苍白球铁沉积模型，明确苍白球中的铁

沉积是否与运动障碍有关并探索其机制。

方法：

正常2月龄C57BL/6小鼠经鼻给予枸橼酸铁胺（Ferricammoniumcitrate，FAC）

200mg/kgExternalglobuspallidus

（），隔天一次持续三周，建立外侧苍白球（，

GPe）铁沉积模型，对照组给予等体积的生理盐水。应用爬杆、步态分析检测小鼠

的运动功能；应用水迷宫实验检测小鼠的学习与反转学习的能力；应用同步辐射X

荧光分析和Perl’s铁染色方法检测GPe和腹侧苍白球（Ventralglobuspallidus，VP）

铁沉积情况；应用Perl’s铁染色免疫组织化学染色双标记方法检测-GPe中铁沉积

的细胞类型；应用铁试剂盒检测脑脊液和血清中铁的含量；应用免疫印迹方法检测

SNTyrosinehydroxylaseTHGPe

小鼠中酪氨酸羟化酶（，）蛋白和中铁死亡相关蛋

白长链酯酰辅酶A合成酶4（Acyl-CoAsynthetaselongchainfamilymember4，

ACSL44Glutathioneperoxidase4GPX4

)、谷胱甘肽过氧化物酶（，）蛋白表达水平

变化；应用免疫荧光双标记方法检测铁死亡发生的细胞类型；应用超敏电化学发光

MesoscalediscoveryMSDGPe

检测技术（，）检测小鼠中促炎因子水平的变化。在

建立GPe铁沉积模型小鼠后，GPe立体定位注射铁死亡诱导剂RSL3（40μM，200

nL）一周后，应用MDA试剂盒检测GPe中脂质过氧化水平；应用透射电子显微镜

观察GPe中线粒体形态学变化；应用高效液相色谱法（Highperformanceliquid

chromatographyHPLC

，）检测纹状体中多巴胺及其代谢产物的含量变化。在建立

GPe铁沉积模型小鼠过程中腹腔注射铁死亡抑制剂Liproxstatin-1（Lip-1，10

mg/kgRNA2

），隔天一次持续三周，再次检测上述指标的变化。应用测序分析月

龄和15月龄小鼠立体定位注射RSL3后GPe脑区差异表达基因和信号通路，在15

GPeRSL340