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miRNA-574-5p调控QKI/Wnt4促进喉癌发展的

机制研究

摘要

研究目的：

喉鳞状细胞癌(Laryngealsquamouscellcancer，LSCC)是一种常见的恶性肿瘤，在

头颈部肿瘤中排名第二位，是全球第六大常见癌症。2020年，全球新增喉癌患者超过

18万人，新增死亡病例接近10万人。尽管在过去的十年中喉癌的治疗方式有了很大的

改进，但是5年总生存率从66%下降到63%，复发和放化疗抵抗是晚期喉癌患者死亡

的主要原因。因此，迫切需要有效的生物标志物来实现喉癌早期诊断与治疗。以往研究

表明，miR-574-5p在多种癌症中发挥重要作用，并且参与顺铂耐药机制，然而其在喉

癌中的表达及其作用尚未得到充分阐明。因此，本研究旨在探究miR-574-5p在喉癌中

的表达及作用机制。

研究方法：

1.通过GEO数据库下载了喉癌miRNA数据集（GSE133632），通过GEO2R工

具分析数据集中差异表达基因，选取了数据集中miRNA-574-5p在喉癌组织中

高表达的16对样本进行统计学分析。

2.利用数据库预测miRNA-574-5p靶基因，通过Westernblot、荧光素酶等实验进

行靶基因验证。

3.经伦理委员会批准，收集了青岛大学附属烟台毓璜顶医院喉癌标本20例及癌

旁标本20例。利用RT-qPCR及Westernblot等对癌和癌旁组织中miRNA-574-

5p、靶基因及下游分子的表达进行分析。

4.利用RT-qPCR及WB分析AMC及Tu212两种喉癌细胞系以及正常上皮细胞

系NP69中miRNA-574-5p、靶基因及下游分子的表达情况。

5.体外将miR-574-5p抑制剂或模拟物转染到喉癌细胞中，并利用CCK8、划痕实

验、Transwell实验评估miR-574-5p对喉癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。

6.抑制QKI表达，观察对AMC细胞增殖、迁移、侵袭的影响，并通过Western

blot分析下游分子的表达变化。

7.将miR-574-5p和靶基因的抑制剂共转染到AMC细胞，观察AMC细胞增殖、

迁移、侵袭的变化以及下游分子的表达，以明确miR-574-5p在喉癌中的调节机

制。

8.利用不同浓度的顺铂处理miR-574-5p抑制剂转染的AMC细胞，通过CCK8观

I

察不同浓度顺铂对细胞活性的影响。

研究结果：

1.GEO数据库喉癌miRNA数据集（GSE133632）以及喉癌和癌旁组织标本分析

结果表明：与癌旁组织相比，喉癌组织中miRNA-574-5p高表达，结果具有统

计学意义。

2.通过Targetscan预测靶基因发现QKI可能为miR-574-5p的靶基因并在Tarbase

数据库得到了同样的结果，根据Westernblot分析，miR-574-5p的下调增加了

AMC细胞中QKI的蛋白表达，荧光素酶报告证明了miR-574-5p与QKI的直

接靶向关系。

3.RT-qPCR及Westernblot分析结果表明：与癌旁组织相比，喉癌组织中Wnt4高

表达，靶基因QKI低表达，Wnt4高表达组与miRNA-574-5p高表达组相对应，

结果具有统计学意义。

4.RT-qPCR结果显示：喉癌细胞系AMC及Tu212中miRNA-574-5p、Wnt4高表

达，QKI低表达。相比较而言，AMC细胞中miRNA-574-5p、Wnt4、QKI表达

差异更加显著，所以我们选取AMC细胞作为后续实验细胞。

5.分别用miR-574-5pmimic和miR-574-5pinhibitor转染细胞。在miR-574-5p

mimic组中，细胞活率