组织细胞培养技术.pptVIP

受酶和酸的作用易分解。02主要成分为氨基酸，浓度100～200mg/L。01胳朊加水分解物马铃薯去皮和芽，煮30分钟，过滤，一般150～200mg/L。对pH缓冲作用大。12酵母提取液、麦芽提取物、苹果汁、番茄汁、黄瓜果实、未熟玉米的胚乳。遇热较稳定，大多在培养困难时使用，有时有效。12其它（五）培养材料的支持物琼脂（agar)凝固剂，一般0.6～1%.为防此有害物质毒害，可加1～10g/L的活性炭。其它：玻璃纤维、滤纸桥等。（六）抗生物质防止内生菌，可加抗生物质。Hypocotylsofpapayawerecontaminatedbyendogenousbacteria壹肆保存：无机成分在一起时，可能产生沉淀，应分别保存；叁配制母液，按所使用药品的类别，分别配成大量元素、微量元素、维生素等；贰为减少工作量，一般配制所需浓度高10-100倍的母液(Stocksolution)；（一）母液配制和保存培养基的制备要用重蒸馏水，等级较高的化学纯或分析纯的药品，称量或定容要准确；01配好的母液瓶上注明母液号、配制倍数、日期、及配1升培养基时应取的量。02低温下可保存几个月。03标题01大量元素配制成10-20×的母液02微量元素配制成100-200×的母液04培养用培养基按需要按比例加入03激素单独配制成mg/ml的母液培养基配制1）母液Ⅰ（大量元素，20×）成分用量每升培养基用量成分用量每升培养基用量g/5L2）ml母液Ⅲ（铁盐，100×）mg/lmlNH4NO3165.050FeSO4.7H2O2780.010KNO3190.0Na2.EDTA.2H2O3730.0CaCl2.2H2O44.03）有机成分（100×）mg/lmlMgSO4.7H2O37.0肌醇1000010KH2PO417.0烟酸5010母液Ⅱ（微量元素，100×）(mg/l)ml盐酸吡哆醇5010KI83.0010盐酸硫胺素1010H3BO3620.00甘氨酸20010MnSO4.4H2O2230.001）：大量元素母液配制时按表中的顺序进行混匀ZnSO4.7H2O860.002）：混合贮存于5L的容量瓶中Na2MoO4.2H2O25.003）：有机成分分别存放CuSO4.5H2O2.50?CoCl2.6H2O2.50?加重蒸馏水按序加母液生长调节物质加蔗糖熔琼脂5.4.3.2.1.（二）过程一般加0.1～1N的HCl（或NaOH）；01通常使用的pH值范围是5.5～6.5。pH在4.0以下或7.0以上培养物就不能正常生长。由于外植体的吸收，引起培养过程中pH变化高压灭菌引起pH变化02（三）pH值的调节三种方法：虹吸式、滴管方法、漏斗；01分注适量，一般占试管或三角瓶的1/3～1/4；02不要把培养基粘到管壁；分注后马上用棉盖塞住，并做好标记。03（四）培养基分注：趁热分注AB高压蒸气锅灭菌，压力0.8～1.1kg/cm2，保持15～20min。A进行三天预培养，一般至多保存2周。B灭菌（五）灭菌和洗涤培养基：湿热灭菌，即高压高温蒸汽灭菌。01玻璃器皿：湿热灭菌或干热灭菌，即在烘箱中加热至150℃40分钟，或120℃2小时。02金属器皿：干热灭菌。03接种室：接种室常采用定期熏蒸，熏蒸剂常用甲醛加高锰酸钾，每100ml甲醛加5g高锰酸钾。04?培养基体积与灭菌时间的关系培养基体积（ml）灭菌温度（℃）灭菌时间（min.）20－501212050－50012125500－500012535小口器皿：清水冲洗衣粉刷子刷自来水蒸馏水洗1次烘箱烘干01大口器皿：清洗前，要先浸泡2小时。02洗涤玻璃器皿洗涤：新的玻璃器皿01已使用过的试管、烧杯、三角瓶02吸管、滴管等内径狭小的玻璃制品塑料用品洗涤：一般用合成洗涤剂洗涤，因其附着力较强，冲洗时必须反复多次，最后用蒸馏水冲洗。03金属用品洗涤：金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤，需要清洗时，一般用酒精擦洗，然后火焰干燥。04生长调节物质是培养基中的关键物质，对植物组织培养起决定性作用。生长调节物质的应用2,4-D：可促进愈伤