细菌的培养及鉴定.ppt

01血平板：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性02mac平板：大小、形状、颜色、透明度、湿润度、黏度03巧克力平板：大小、形状、颜色、透明度、湿润度、黏度观察细菌在平板上的生长现象革兰阴性菌葡萄球菌细菌的分离与纯化：自血平板挑出待检菌株的单菌落进行初步的鉴定。如果混有杂菌，应该重新转种分纯。01染色与镜检：首先通过革兰氏染色确定基本的分类：（1）G+球菌（2）G-球菌（3）G-杆菌（4）G+杆菌。此外，如果镜下发现革兰氏染色阳性、椭圆形、有芽孢状的较大菌体，可能是真菌。02细菌的初步分类03分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和甘露醇02血平板上菌落有明显β溶血环，颜色呈金黄色、灰白色或柠檬色01最重要的致病葡萄球菌04血浆凝固酶和DNA酶阳性金黄色葡萄球菌葡萄球菌**尽量取早晨第一次尿液嘱患者留取标本的前一天晚上少饮水女性病人收集标本前用肥皂水冲洗外阴，再以灭菌清水冲洗尿道口排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿男性病人翻转包皮，清洗尿道口排出几毫升后，不停止尿流,采集中段尿采集标本后立即送检！清洁中段尿液哥伦比亚血平板—营养要求高的细菌1巧克力平板—含V、X因子，主要培养嗜血杆菌、脑膜炎球菌和淋球菌用2中国蓝/麦康凯平板—G-杆菌用3SS平板—沙门氏菌和志贺氏菌用4M-H平板—细菌药敏用5TCBS平板—弧菌科细菌用6沙包氏平板—真菌培养用7真菌显色平板—真菌培养用8罗氏培养基—分枝杆菌用9常用的培养基种类和用途血：血培养瓶中断尿：血平板、mac平板脑脊液：血培养瓶、血平板、巧克力平板大便:.麦康凯、SS、血平板穿刺液：血培养瓶、血平板、巧克力平板、mac平板胆汁：血平板、巧克力平板、mac平板临床标本培养基选择01灭菌接种环02沾取标本03接种04灭菌接种环细菌接种的基本程序平板划线接种法：01目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。02方法：03分区划线法：适用于含菌量较多的标本04连续划线法：适用于含菌量较少的标本05细菌接种法第一区划线01灭菌接种环02第二区划线03灭菌接种环04第三区划线05灭菌接种环06分区划线法(3区)连续划线法一般培养（需氧培养）：培养温度：35℃（采用恒温培养箱）培养时间：18～24h二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养箱厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等010302细菌培养法细菌在固体培养基中的生长现象菌落定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M）菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。菌落菌落与菌苔1粘液型菌落（MucoidtypeColony）又称M型32粗糙型菌落（RoughtypeColony）：又称R型光滑型菌落（SmoothtypeColony）：又称S型菌落的三个类型：S型菌落R型菌落M型菌落革兰染色原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经复红等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。革兰染色步骤涂片包括涂片、干燥、固定三步。涂片干燥固定010204可改变菌体对染料的通透性；加热固定可杀死细菌，比较安全。使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘得更牢固；固定的目的：复染冲洗脱色冲洗媒染冲洗初染结晶紫1’碘液1’95%乙醇30”复红1’冲洗滤纸干燥油镜观察革兰染色程序紫色（G＋）革兰氏染色步骤示意图革兰染色甲菌乙菌初染结晶紫媒染碘液脱