多肽材料三维储存对AMR介导4℃血小板清除的影响.pdfVIP

摘要

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足量、安全、有效的血小板贮备是临床血小板输注治疗的重要基础。冷藏是

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延长血小板储存的重要途径之一，但血小板易发生低温损伤，输入体内后会被迅

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速清除，限制了其临床应用。如何改善血小板储存微环境，最大限度维持血小板

正常代谢，减少细胞储存损伤成为输血医学研究的重要命题。为改善细胞体外储存微

环境，课题组前期开发了一种能够模拟细胞外基质为细胞提供三维环境的新型多肽自

组装材料，实现了间充质干细胞体外4℃三维储存，提高4℃储存后细胞生存、增殖、

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迁移和分化能力。基于多肽自组装材料三维微环境所具有的能够减轻条件下细胞

低温损伤和维持细胞正常代谢的能力，为建立血小板储存新方式提供了新思路。因此，

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本研究基于多肽自组装材料进行血小板三维储存，并探索其对血小板质量的影响

及抗清除机制，具体包括以下研究内容：

首先，进行了多肽材料的理化性能研究。通过多肽成胶及剪切自修复试验证实，

不同浓度的多肽均能够在激发蛋白的作用下快速发生自组装，且该多肽材料自组装成

胶后可剪切稀化，具有剪切自修复的能力；通过透射电镜观察多肽材料的微观结构，

发现其能自组装形成致密的多孔纤维网络结构；进一步，通过共聚焦显微镜观察4℃

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血小板在自组装多肽材料形成的纤维网络中的分布情况，发现该多肽材料对血小

板具有良好的立体支撑性能；随后，通过溶血率及血常规检测证实，多肽材料的加入

不会引起红细胞溶血，且多肽材料输注到小鼠体内未引起血液质量的改变，具有良好

的血液相容性。以上结果表明：该多肽材料具有良好的自组装性能、剪切自修复性能、

细胞立体支撑性能及血液相容性，可模拟细胞外微环境，减少血小板堆积，推测其可

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应用于血小板三维储存。

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在上述工作基础上，开展了基于多肽自组装材料的血小板三维储存及储存后

质量评价。通过流式细胞术检测储存后4℃血小板的凋亡及活化水平变化，证实该多

肽自组装材料具有减轻低温诱导的血小板损伤的能力；通过对储存后血小板生化指标

的检测，发现该储存方式能够减缓4℃血小板局部缺氧造成的糖酵解及乳酸堆积；通

过体内共培养实验及体内输注实验发现其在体外有效降低血小板的吞噬率，且能够降

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低体内清除率。以上结果表明：本研究构建的血小板三维储存方式能够稳定维持

血小板生理功能，提升血小板储存质量，减轻血小板的低温损伤，降低清除率并提高

输注有效性。

进一步，初步探究了基于多肽自组装材料的4℃血小板三维储存降低体内外清除

速率的机制。文献表明，血小板去唾液酸化水平与血小板清除率呈正相关。去唾液酸

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化蛋白受体（）能够识别衰老的血小板，促进肝实质细胞内吞或介导肝枯否

细胞吞噬，进而实现外周血循环中衰老血小板的高效清除，是研究血小板清除机制的

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核心功能分子。基于此，本研究检测了血小板储存过程中血小板表面去唾液

酸化相关凝集素的表达情况，结果显示随着储存时间的延长，4℃血小板三维储存组

去唾液酸化的水平较2D储存组显著降低；随后，构建了小动物肝脏AMR可视化模

型，实时监控血小板输注后肝细胞表面AMR的表达情况，结果表明：与2D组相比

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较，输注三维储存的血小板能够显著降低小鼠肝脏