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柱后衍生法测定食用油中黄曲霉毒素B1含量的研究

一、1.研究背景与意义

(1)随着人们生活水平的不断提高，食品安全问题日益受到广泛关注。食用油作为日常生活中不可或缺的食品，其质量直接关系到人们的健康。黄曲霉毒素B1（AflatoxinB1，AFB1）是一种强烈的致癌物质，主要存在于受黄曲霉菌污染的粮食和油料作物中。AFB1的摄入量过多可能导致肝癌等严重疾病，因此，对食用油中AFB1的检测与分析具有重要意义。

(2)柱后衍生法（Post-columnDerivatization，PCD）是一种在色谱分离过程中对目标化合物进行衍生化的方法，广泛应用于食品、药品和环境样品中痕量组分的测定。相较于传统的检测方法，柱后衍生法具有灵敏度高、选择性好、操作简便等优点。在食用油中AFB1的检测中，柱后衍生法能够提高检测灵敏度，降低检测限，对于保障食品安全具有重要作用。

(3)目前，食用油中AFB1的检测方法主要包括高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）等。然而，这些方法在检测过程中存在一定的局限性，如前处理复杂、检测成本高、操作步骤繁琐等。因此，本研究旨在探讨柱后衍生法在食用油中AFB1含量测定中的应用，以期为食用油中AFB1的快速、准确检测提供一种新的方法，从而为食品安全监管提供有力支持。

二、2.材料与方法

(1)实验材料：本研究采用市售橄榄油、花生油和大豆油作为研究对象，其产品标签显示符合国家标准。AFB1标准品（纯度≥98%）购自中国国家标准物质研究中心。试剂包括甲醇、乙腈（色谱纯）、乙酸乙酯（分析纯）、氢氧化钠溶液（分析纯）等。仪器设备包括高效液相色谱仪（HPLC，型号：Agilent1260Infinity）、柱后衍生化装置（型号：ShimadzuLC-20AD）、荧光检测器（型号：ShimadzuRF-20AXL）等。

(2)实验方法：样品前处理采用溶剂萃取法。准确称取5.0g食用油样品，加入20mL甲醇，超声提取30分钟，静置，取上清液。加入1.0mL氢氧化钠溶液，调节pH至9.0，再加入10mL乙酸乙酯，振荡提取，静置分层。取乙酸乙酯层，氮气吹干，残留物用乙腈溶解并定容至1.0mL。柱后衍生化：取上述溶液，加入1.0mL衍生化试剂（乙酰氯溶液），在80℃水浴中反应30分钟。高效液相色谱分析：采用C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），流动相为乙腈-水（体积比80:20），流速为1.0mL/min，柱温为30℃。荧光检测器检测波长为365nm和438nm。

(3)数据处理：根据标准曲线法计算AFB1含量。以AFB1标准品溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，线性范围为0.5～20ng/mL。样品中AFB1含量计算公式为：C（AFB1）=（A/S）×M/V，其中A为样品溶液峰面积，S为标准曲线斜率，M为AFB1标准品浓度，V为样品溶液体积。以橄榄油、花生油和大豆油为例，AFB1含量分别为0.15mg/kg、0.20mg/kg和0.18mg/kg。通过该方法，本实验对食用油中AFB1含量的检测限为0.1ng/g，回收率为90%～110%，精密度RSD为2.5%～4.5%。

三、3.结果与分析

(1)本研究采用柱后衍生法对市售橄榄油、花生油和大豆油中的黄曲霉毒素B1（AFB1）含量进行了测定。实验结果显示，三种食用油样品中AFB1的平均含量分别为0.15mg/kg、0.20mg/kg和0.18mg/kg，均在国家食品安全标准限值（≤0.5mg/kg）范围内。具体到每个样品，橄榄油样品中AFB1含量的标准差为0.012mg/kg，变异系数为7.8%；花生油样品中AFB1含量的标准差为0.015mg/kg，变异系数为7.5%；大豆油样品中AFB1含量的标准差为0.013mg/kg，变异系数为7.2%。通过对比不同品牌和不同批次的食用油样品，发现AFB1含量存在一定差异，这与原料来源、储存条件等因素有关。

(2)在本实验中，柱后衍生法对AFB1的检测限达到了0.1ng/g，远低于国家食品安全标准规定的最低检测限（10ng/g）。通过优化实验条件，如衍生化试剂的浓度、反应时间、流动相比例等，提高了检测灵敏度和准确度。以橄榄油样品为例，当衍生化试剂浓度为0.5mol/L，反应时间为30分钟，流动相比例为80:20时，AFB1的回收率达到了90%～110%，精密度RSD为2.5%～4.5%。此外，该方法对其他黄曲霉毒素（如AFB2、AFM1等）的检测灵敏度较低，表明柱后衍生法对AFB1具有较高的选择性。

(3)与传统检测方法相比，柱后衍生法具有以下优势：首先，该方法操作简便，前处理过程简单，节省了时间和人力成本；其次，检测灵敏度高，能够满足食品安全标准的要求；最后，该方法具有较高