临床免疫学检验PPT课件 固相膜免疫分析技术.pptx

第十章固相膜免疫技术医学检验技术专业新型课程体系

课程导入（思政）15min便可得知新冠病毒抗原结果，解决了2019-nCoV潜伏期感染者的早期发现困难的问题，缓解了核酸检测必需复杂设备和特殊环境条件的不足，疫情期间大规模应用于新冠病毒检测分类施策“抗原筛查”中。新冠病毒抗原检测新冠病毒抗原检测

目录第一节免疫层析试验第五节方法学评价及临床应用第二节免疫渗滤试验第三节斑点酶免疫吸附试验第四节免疫印迹试验CONTENTS

教学目标掌握熟悉了解免疫层析试验、免疫渗滤试验、斑点酶免疫吸附试验及免疫印迹试验的基本原理、方法类型及技术要点。各种固相膜免疫技术的方法学评价及临床应用。各种固相膜免疫技术的试验材料及影响因素。

PARTONE第一节免疫层析试验

第一节免疫层析试验概述免疫层析试验（immunochromatographyassay，ICA）是免疫标记技术和蛋白质层析技术相结合的以微孔膜为载体的快速固相膜免疫分析技术（solidphasemembrane-basedimmunoassay，SPMI），是液体侧向横流形式的SPMI。根据标记物的不同，可分为胶体金免疫层析试验（goldimmunochromatographyassay，GICA）和荧光免疫层析试验（fluorescenceimmunochromatographicassay，FICA）等。

一、基本原理与方法类型1.基本原理2.方法类型（1）胶体金免疫层析试验：双抗体夹心法、竞争法。（2）荧光免疫层析试验。二、技术要点1.胶体金免疫层析试验2.荧光免疫层析试验层级目录第一节免疫层析试验

一、基本原理与方法类型1.基本原理一般以NC膜等为固相载体，样品溶液借助毛细管的虹吸作用在层析条上泳动移行，同时样品中的待测物与层析材料上的待测物受体（抗原或抗体）发生免疫反应，高特异性与高亲和性的反应使免疫复合物逐渐富集在层析材料的一定区域，通过检测富集的结合标记物（胶体金颗粒或荧光素等）而获得实验结果。游离标记物则越过检测带，与结合标记物自动分离。第一节免疫层析试验

2.方法类型（1）胶体金免疫层析试验：双抗体夹心法、竞争法。第一节免疫层析试验

胶体金免疫层析试验是以胶体金为标记物的ICA。多用于检测抗原，但亦可用于检测抗体。方法包括双抗体夹心法、竞争法及间接法等。临床常用的是双抗体夹心法及竞争法。第一节免疫层析试验

双抗体夹心法常用于检测大分子抗原。GICA检验卡一般为条形，分为5个区。①样品（sample，S）区，在此区滴加样品。②金标抗体（goldlabeledantibody，G）区，含金标特异性抗体干试剂。③测试（test，T）区，包被特异性抗体。④对照（control，C）区，包被抗免疫球蛋白抗体。⑤吸水（waterabsorption，W）区。第一节免疫层析试验

检验时于S区滴加样品，在毛细作用下，样品液体向检验卡另一端移行；流经G区时，将金标抗体复溶，若待测标本中含待测抗原，即形成金标抗体-抗原复合物，继续向前移行；移至T区时，与包被的特异性抗体结合，形成金标抗体-抗原-抗体复合物，金标抗体被固定下来，在富集作用下，T区显示红色线条，呈阳性，多余的金标记抗体继续向前移行；移至C区时，被包被的抗金标抗体捕获，在C区显示红色质控线条；多余液体流向W区。第一节免疫层析试验

ICA双抗体夹心法原理示意图第一节免疫层析试验

竞争法常用于检测小分子抗原。GICA检验卡的T区包被标准抗原。检验时于S区滴加样品，在毛细作用下，样品液体向检验卡另一端移行；流经G区时，将金标抗体复溶，若待测标本中含待测抗原，即形成金标抗体-抗原复合物，继续向前移行；移至T区时，因无足够游离的金标抗体与包被的标准抗原结合，无红色线条出现，实验结果为阳性，含金标抗体-抗原复合物的溶液继续向前移行；移至C区时，被包被的抗金标抗体捕获，在富集作用下，在C区显示红色质控线条。第一节免疫层析试验

若待测标本中不含待测抗原，在G区无法形成金标抗体-抗原复合物，复溶的金标抗体向前移行；移至T区时，金标抗体与包被的标准抗原结合，出现红色线条，实验结果为阴性，剩余的金标抗体继续向前移行；移至C区时，被包被的抗金标抗体捕获，在C区显示红色质控线条。第一节免疫层析试验

ICA竞争法原理示意图第一节免疫层析试验

（2）荧光免疫层析试验：FICA是以荧光素为标记物的ICA。FICA以荧光素标记相应的抗体或抗原，然后利用荧光检测仪检测检验卡上富集的反应结合物激发产生的荧光强度，以荧光强度推测样品中抗原或抗体的浓度。FICA具有GICA简便快捷、即时检验的优点，同时具有较高的敏感性。FICA与GICA的基本步骤相同，临床常用方法有夹心法、竞争法等。第一节免