临床免疫学检验PPT课件 临床免疫检验自动化分析.pptx

;;;临床免疫检验自动化分析（automatedanalysisofclinicalimmunetesting）是基于不同的免疫分析原理，采用一种或两种免疫分析技术（如免疫散射比浊分析技术、酶免疫测定技术、直接化学发光免疫测定技术、化学发光酶免疫测定技术、时间分辨荧光免疫测定技术、电化学发光免疫测定技术等），将免疫检验过程中的加样、加试剂、混合、温育、固相载体分离、信号检测、数据处理、结果报告、检测后的仪器清洗和样本后处理等步骤根据计算机内软件程序设置，自动化地完成上述整个免疫检验过程。;PART

ONE;一、分析原理

抗原、抗体在特定的电解质溶液中发生的液相沉淀反应，形成相对分子量小于19S的小分子免疫复合物，增浊剂（如聚乙二醇等）使小分子免疫复合物迅速沉降形成相对分子量大于19S的大分子免疫复合物微粒，反应液出现浊度。

可溶性抗原与相应抗体特异性结合生成免疫复合物，复合物对光线产生折射而形成散射光，散射光强度与复合物的分子量、大小、数目及入射光强度成正比，与入射光波长、免疫复合物至检测器的距离成反比。;可溶性抗原与相应抗体特异性结合生成免疫复合物，复合物对光线产生折射而形成散射光，散射光强度与复合物的分子量、大小、数目及入射光强度成正比，与入射光波长、免疫复合物至检测器的距离成反比。复合物颗粒直径大小不同，散射光分布不同。;二、分析类型

（一）定时散射比浊法（timingnephelometry）

在保证抗体过量的情况下，加入待测抗原，抗原抗体结合反应即开始。

定时散射比浊反应分两个阶段，即预反应阶段和反应阶段。在反应刚开始的极短时间内（预反应阶段7.5s～2min），反应介质中散射信号变动很大，如果此时计算峰值信号而获得的结果会产生一定误差。因此在测定散射信号时，避开抗原、抗体反应的预反应阶段，在反应的最佳时段（反应阶段）进行读数，从而使这种误差降至最低。;定时散射比浊测定的自动化分析包括以下内容：

1.抗原抗体预反应阶段

2.反应阶段

（1）抗原过量的阈值限定；

（2）抗体过量。

3.信号检测;（二）速率散射比浊法（ratenephelometry）

是一种抗原与抗体结合的动力学测定方法。;???率散射比浊法

抗原与抗体混合后瞬间即发生反应，在抗体过量的前提下，该反应速度由慢到快，连续动态监测此过程，单位时间内形成的免疫复合物不断增多，抗原抗体结合速率最大的某一时刻称为这个速率峰，此时散射光强度变化最大，随后逐渐减少。;速率散射比浊试验的自动化分析包括以下内容：

（1）抗原-抗体反应；

（2）结果计算。

为保证检测结果的准确性，应检测样本中抗原含量。;（三）透散射融合增强技术

透散射融合增强技术是在同一机器上大直径纳米微球做散射，小直径纳米微球做透射，中间则是透射的融合，将两种技术相结合。

透散射融合增强检测具备以下特点：

（1）保证检测低限的灵敏度和重复性；

（2）保证检测高限的重复性；

（3）有效应对HOOK效应。;三、影响因素

1.抗原抗体比例及抗体质量

2.增浊剂

3.伪浊度

4.激发光源和波长

5.制备校准曲线和室内质量控制;PART

TWO;康复原则;康复原则;一、仪器组成和性能

1.条形码识别系统

2.加样系统和样本架

3.试剂架

4.温育系统

5.液路系统

6.洗板系统

7.酶标板读数仪

8.自动装载传递系统

9.计算机管理和信息系统;二、仪器评价

全自动酶免分析仪中的连体机是将“样本处理工作站”和“全自动酶免分析仪”联合起来，检测速度快，自动化程度高，适合大批量样本的处理，如血站系统、大规模体检。

分体机，样本处理站和后处理系统互相独立，可以根据检测项目灵活使用，适合检测项目多、样本数量不等的临床实验室。;PART

THREE;康复原则;一、时间分辨荧光免疫测定的自动化分析

（一）原理

各种蛋白质、组织和一些化合物在激发光的照射下都能发出一定波长的荧光，这些荧光为非特异性荧光，会干扰荧光免疫测定的灵敏度和特异性。但这些荧光的寿命一般为1～10纳秒（ns）。而镧系元素的荧光寿命为10～100微秒（μs）。利用这一特性，待背景荧光完全衰变后，再测量镧系元素的特异性荧光，可有效地降低本底非特异性荧光的干扰。;（二）以双抗体夹心法为例，时间分辨荧光免疫测定的自动化分析包括以下内容

1.抗原抗体免疫复合物的形成

2.加入铕（Eu3+）螯合抗体

3.加入酸性增强液

4.荧光信号的检测;（三）影响因素

1.试剂交叉污染

实验过程中所用的器材和试剂应尽量防尘；环境、试剂、容器等里面的镧系元素易污染分析用的酸性增强液，从而使本底升高。

2.微孔板选择

不同厂家生产的微孔板，所产生的荧光有很大差异。;二、荧光酶免疫测定的自动化分析

荧光酶免疫测定的自动化分析即为碱性磷酸酶标记