临床免疫学检验PPT课件 放射免疫技术.pptx

第六章放射免疫技术医学检验技术专业新型课程体系

目录CONTENTS第一节第二节第三节放射免疫分析免疫放射分析方法学评价及临床应用

教学目标掌握熟悉了解放射免疫分析与免疫放射分析的原理、异同点。放射性核素的特点。放射免疫技术的临床应用。

PARTONE第一节放射免疫分析

第一节放射免疫分析放射免疫技术概念放射免疫技术是一种将放射性核素的高度灵敏性和抗原抗体反应的特异性相结合，体外测定超微量（10-15～10-9g）物质的免疫分析技术。

一、放射免疫分析概念放射免疫分析（radioimmunoassay，RIA）：利用放射性核素标记抗原，让待测抗原与标记抗原竞争性结合限量抗体，通过测定标记抗原-抗体复合物的放射性强度来反映待测抗原的含量。第一节放射免疫分析

二、基本原理RIA竞争性抗原抗体结合反应示意图第一节放射免疫分析

三、技术要点（一）标记抗原抗体的制备1.抗原抗体的制备抗原：高纯度。抗体：高亲和力；特异性强；效价高。2.示踪物目前常用的放射性核素是125I，优点为：化学性质活泼，容易标记。衰变过程不产生射线。可用晶体闪烁计数仪直接测量γ射线。125I的半衰期较长、比活度高。第一节放射免疫分析

（二）抗原抗体结合反应平衡法：在反应体系内同时加入待测抗原或标准抗原、标记抗原和限量的抗体，混匀后，在一定温度下孵育一定时间，使三种成分的反应几率相同。顺序饱和法：在反应体系内先加待测抗原（或标准抗原）和限量抗体，使待测抗原（或标准抗原）优先与抗体结合并达到平衡，然后再加入标记抗原，与剩余的抗体结合。第一节放射免疫分析

（三）B/F分离技术双抗体法PR试剂法活性炭吸附法固相分离法微孔滤膜分离法第一节放射免疫分析

（四）放射性强度测定普遍使用晶体闪烁计数仪检测放射性强度。计数单位是仪器输出的电脉冲数，单位为计数/分（cpm）或计数/秒（cps）。计算核素的放射性衰变，单位以衰变/分（dpm）或衰变/秒（dps）表示。第一节放射免疫分析

（五）数据处理logistic四参数拟合曲线线性方程第一节放射免疫分析

PARTTWO第二节免疫放射分析

一、免疫放射分析概念免疫放射分析（immunoradiometricassay，IRMA）：是在RIA的基础上发展而来，以放射性核素标记抗体，采用固相免疫吸附方法分离免疫复合物和游离的标记抗体。第二节免疫放射分析

二、基本原理（一）单位点IRMA法单位点IRMA法先用过量的Ab*与Ag温育，结合形成Ag-Ab*复合物，反应平衡后，加入固相抗原（Ag#）与游离的Ab*结合形成Ag#-Ab*复合物沉淀，离心去除沉淀物，测定上清液Ag-Ab*复合物的放射性强度。第二节免疫放射分析

双位点IRMA反应原理示意图（二）双位点IRMA法固相抗体（Ab#）与标记抗体（Ab*）同时与待测抗原（Ag）的两个位点结合，形成Ab#-Ag-Ab*复合物，洗涤除去游离的Ab*，测定Ab#-Ag-Ab*复合物（B）的放射性强度。第二节免疫放射分析

（三）标记第三抗体法标记第三抗体法是在双位点IRMA的基础上，进一步改良为用125I标记第三抗体（Ab3*，即抗Ab2抗体），反应后形成Ab#-Ag-Ab2-Ab3*四重免疫复合物。第二节免疫放射分析

BAS-IRMA反应模式（四）BAS-IRMA法将生物素-亲和素系统引入IRMA，以生物素化抗体和125I标记亲和素（或链霉亲和素）为示踪剂，使检测方法的灵敏度、特异性和精密度大大提高。第二节免疫放射分析

（五）双标记液相IRMA技术将两株高特异性单克隆抗体（monoclonalantibodies，McAb）分别以125I和异硫氰酸荧光素（fluoresceinisothiocyanateisomer，FITC）作为标记试剂，将待测样品和标记抗体加至试管中,温育后加入磁性固相抗FITC,反应后置于磁性分离器上可将B/F分离，洗涤后即可测量放射性强度。第二节免疫放射分析

三、技术要点（一）抗原抗体反应将待测样品/标准抗原和标记抗体同时加入固相抗体反应管，进行抗原抗体反应，在一定条件下温育，使反应达到平衡。（二）B/F分离采用固相吸附分离法：固相抗体捕获液相中的抗原，在固相材料表面结合形成复合物，而未结合物质（如游离的标记抗体）存在于液相中，通过洗涤弃去液相中的未结合物质，即可分离B/F。第二节免疫放射分析

（三）放射性强度测定测定固相标记结合物（B）的放射性强度。（四）数据处理以标准抗原浓度为横坐标，固相标记结合物的放射性强度为纵坐标绘制标准曲线，根据标准曲线计算待测样品的抗原含量。第二节免疫放射分析