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裂头绦虫幼虫检测技术

1范围

本标准规定了裂头绦虫幼虫检测技术的操作流程。

本标准适用于各级疾病预制机构和食品检测机构对水产品中裂头绦虫幼虫的检测。

2规范性文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的文件，其版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析用水规格和试验方法（eqvISO3696:1987）。

SN/T1193检验技术要求。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1水产品（aquaticproducts）

指海洋和淡水渔业生产的动植物及其加工产品的统称。

3.2裂头蚴（plerocercoidlarvae）

指裂头绦虫的幼虫，是假叶目（Pseudophyllidea）裂头科（Diphyllobothriidea）绦虫的第三期幼虫

的总称。

3.3阔节裂头蚴（plerocercoidlarvaeofDiphyllobothriumlatum）

指阔节裂头绦虫的幼虫，阔节裂头蚴寄生在鱼体内，为乳白色，头节呈匙形，大小为2~20×2~3mm。

3.4曼氏裂头蚴（plerocercoidlarvaeofSpirometramansoni）

指曼氏迭宫绦虫的幼虫，曼氏裂头蚴主要寄生在蛙类的体内也可寄生。曼氏裂头蚴呈长带形，

乳白色或淡，大小5~80×3~10mm。

4仪器和器材

4.1生物显微镜（100×~400×）。

4.2体视显微镜。

4.3PCR扩增仪。

4.4电泳仪。

4.5凝胶成像系统。

4.6超净工作台。

4.7高速离心机。

4.8解剖用手术器械。

5试剂和材料

5.1试剂

所有化学试剂均为分析纯。实验用水应符合GB/T6682中一级水的规格。用于提取及PCR

实验的水须为灭菌双蒸水。PCR应符合SN/T1193要求。

5.2材料

人工胃蛋白酶液；Tris-乙酸电泳缓冲液（TAE）；琼脂糖凝胶；6×加样缓冲液（配制见附录

B）；

100~2000bpmarker；50%和70%乙醇。

5.3引物

扩增裂头蚴核糖体转录间隔区（ITS）引物序列；扩增裂头蚴细胞色素C氧化酶（Cox1）引

物序列；阔节裂头蚴特异性引物序列及曼氏裂头蚴特异性引物序列。（见附录B.3）

5.4阳性对照

阳性对照为裂头绦虫相应片段的阳性克隆质粒或裂头蚴、裂头绦虫全组。

6检测步骤

6.1样品

的样品主要是海鱼、淡水鱼、蛙和蛇类。如狗鱼、河鲈鱼、斑鲑魚、江鳕魚、白鲑魚、虹鳟、

湖鳟、三纹鱼、蛙等水产品，采样比例按照GB/T18088-2000出入境动物检疫采样标准执行。

6.2样品检测

检测裂头绦虫幼虫的技术方法有压片检查法、蛋白酶法、检测法。

不同的方法、试剂配制、样品处理、实验步骤（见附录B）。