菌种的管理和保藏.ppt

菌种的保藏和管理杜平华菌种保藏是微生物检验工作中的一项常规技术科学保藏和管理关系到检验结果的正确性.菌种保藏的重要性菌种的—2015版指导原则原则：应来自认可的国内或国外菌种保藏机构的标准菌株，或使用与标准菌株所有相关特性等效的商业派生菌株。01菌种编号2015版02CMCC——中国医学菌种保藏中心03CMCC（F）真菌CMCC（B）细菌04协调案05ATCC美国标准菌种收藏中心06NCIMB英国食品工业与海洋菌种保藏中心07NBRC日本技术评价研究所生物资源中心08CIP法国巴斯德研究所菌种保藏中心使用菌种来源01广泛收集。02选择最适宜的保藏方法，保持菌种的生物学特性。菌种保藏的中心任务常用菌种的保藏菌种保藏的原则根据微生物菌种的生理、生化特性，尽量降低微生物细胞的代谢强度，处于休眠状态，以减低菌种的变异率。A试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌B种为第0代）。C采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。D冷冻保藏：在低温下保藏，一般在低于-30℃或-70℃，是有效的长期储藏方法。E冻干法保藏：是一种长期保藏菌种的方法法。F冷藏：在2～8℃保藏，是短期储藏方法。常用菌种的保藏—2015指导原则01菌种的保藏02低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都可以抑制微生物的代谢和生长繁殖，因此低温、干燥和真空是菌种保藏的重要手段。菌种的保藏01工作菌株不可代替标准菌株，标准菌株的商业衍生物仅可用作工作菌株。标准储备菌株可用于制备每月或每周一次转种的工作菌株。冷冻菌株一旦解冻转种制备工作菌株后,不得重新冷冻或再次使用。0602030405不同的微生物，应根据其生物特征来选择最适宜的保藏方法：01选特征典型的纯菌菌落02确定保藏的合适菌体形态03选择最适宜的方法保藏04定期检查05菌种的保藏菌种的保藏方法主要原理适用的微生物保藏时间特点液氮超低温保藏法超低温广泛数十年复杂、需要专门设备，有效冷冻真空干燥保藏法干燥、缺氧、低温广泛5～10年以上复杂、需要专门设备和方法，有效干燥（沙土、牛奶）保藏法干燥、无营养产孢微生物1～10年较简便，需制备沙土管，有效液体石蜡保藏法低温、缺氧广泛1年以上简便琼脂斜面低温保藏法低温4℃广泛短时间简便液体冷冻保藏法液体培养基低温广泛半年以上简便一定比例甘油低温、缺氧广泛数十年以上简便瓷珠冷冻保藏法低温广泛1年以上简便琼脂斜面低温保藏法菌种培养基保存温度传接时间金黄色葡萄球菌营养琼脂斜面培养基4℃约1个月大肠埃希菌乙型副伤寒沙门菌枯草芽孢杆菌铜绿假单孢杆菌室温生孢梭菌疱肉培养基4℃约3个月白色念珠菌改良马丁琼脂斜面培养基黑曲霉制备方法011%蛋白胨、甘油?,灭菌,接种、培养18-24小时.02保存条件0380℃可保存数年.04液体冷冻保藏法工作菌种传代次数不得超过5代。01021代是指将活的培养物接种到新鲜培养基中，任何亚培养的形式均被认为是转种或传代一次。菌种的传代和使用细菌的接种、分离和培养01接种：将微生物的培养物接种到培养基上的一种操作技术。02接种：03斜面培养基04半固体培养基05液体培养基06平板培养基07基本操作技术040301将细菌分离成单个细胞，使其独立分裂繁殖形成单个菌落的操作技术。涂布分离法方法平板划线-分段划线、连续划线倾注分离法等02分离技术01020304接种后的培养基，根据不同微生物生长条件的要求，培养基放在适宜微生物生长的环境中温度、湿度、氧气等），使其生长繁殖的过程。厌氧培养法05嗜热性微生物：45℃以上。需气菌培养法:嗜温性微生物：15℃～45℃。嗜冷性微生物：15℃以下。06培养培养后微生物的生长判断固体培养基有菌落生长或沿穿刺线扩散生长。液体培养基浑浊、菌膜、沉淀等。菌种的传代和使用冻干菌种（0代）↓增菌培养苏醒（1代）↓增菌培养复壮（2代）→分装冷冻保存