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FNCPJZCY0053茶黄曲霉毒素B1测定液相色谱法

一、1.茶黄曲霉毒素B1概述

(1)茶黄曲霉毒素B1（AflatoxinB1，AFB1）是一种强烈的致癌物质，主要由黄曲霉属和寄生曲霉属的某些菌株产生。其化学结构为二呋喃环与香豆素的衍生物，具有很强的毒性和致癌性。根据世界卫生组织（WHO）的评估，AFB1是所有已知化学物质中致癌性最强的物质之一，其致癌性比苯并芘（BaP）还要强约100倍。AFB1主要污染粮油作物，如玉米、花生、大豆等，长期摄入AFB1污染的食物会对人类健康造成严重威胁。

(2)AFB1的污染问题在全球范围内都十分严重。据统计，全球每年约有1/3的粮食受到AFB1的污染，其中亚洲和非洲地区尤为严重。例如，在非洲，花生和玉米的AFB1污染率高达30%以上，而在亚洲，花生和玉米的AFB1污染率也超过了20%。这些数据表明，AFB1污染已成为全球公共卫生领域的一大挑战。为了降低AFB1的摄入风险，许多国家和地区都制定了严格的食品安全标准和检测方法。

(3)在食品安全检测中，AFB1的检测方法主要包括薄层色谱法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附法等。其中，液相色谱法因其灵敏度高、准确度高、操作简便等优点，已成为目前检测AFB1的主要方法。例如，我国国家标准GB5009.24-2016《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》中规定，玉米、花生等粮油作物中AFB1的限量标准为0.5μg/kg。在实际检测过程中，通过液相色谱法可以快速、准确地测定样品中AFB1的含量，为食品安全监管提供有力保障。

二、2.液相色谱法原理及仪器设备

(1)液相色谱法（High-PerformanceLiquidChromatography，HPLC）是一种利用高压液体作为流动相，通过固定相与流动相之间的相互作用来实现分离分析的色谱技术。该技术具有高效、快速、灵敏等优点，广泛应用于食品、药品、环境等领域。在AFB1的检测中，HPLC法可以提供高分辨率和良好的重复性，使得微量AFB1的检测成为可能。

(2)HPLC系统主要由输液泵、色谱柱、检测器、数据处理系统等部分组成。输液泵负责输送流动相，保证流动相的稳定性和精确流量；色谱柱是分离的核心部分，通常采用反相柱，其填充物为十八烷基硅烷键合硅胶；检测器则用于检测分离物质，常用的检测器有紫外检测器（UV）、荧光检测器（FLD）和二极管阵列检测器（DAD）等。例如，在AFB1的检测中，紫外检测器因其对AFB1有较高的灵敏度而被广泛采用。

(3)HPLC法的样品处理通常包括提取、净化和浓缩等步骤。提取过程中，常用的提取溶剂有乙腈、甲醇、丙酮等，其选择取决于样品的基质和目标分析物的性质。净化步骤旨在去除样品中的杂质，常用的净化方法有固相萃取（SPE）、液-液萃取等。浓缩步骤则用于降低样品体积，提高检测灵敏度。例如，在AFB1的检测中，通过SPE法可以有效地去除样品中的杂质，提高检测结果的准确性和重现性。

三、3.茶黄曲霉毒素B1测定液相色谱法的样品前处理

(1)茶黄曲霉毒素B1（AFB1）的测定液相色谱法样品前处理是确保检测准确性和灵敏度的重要环节。样品前处理主要包括提取、净化和浓缩三个步骤。提取过程中，通常采用乙腈或甲醇作为溶剂，通过液-液萃取或固相萃取（SPE）技术从样品中提取AFB1。对于粮油类样品，提取效率通常较高，提取回收率可达80%以上。

(2)净化步骤是为了去除提取过程中可能残留的杂质，提高检测的准确性和灵敏度。常用的净化方法包括固相萃取（SPE）和液-液萃取。SPE法使用特定吸附剂，如C18或石墨化碳黑等，可以有效去除干扰物质。液-液萃取则利用两种互不相溶的溶剂，通过分配系数的差异实现分离。净化步骤对于提高AFB1的检测限至关重要，通常净化后样品的干扰物质含量可降至检测限以下。

(3)样品浓缩是样品前处理的最后一步，旨在降低样品体积，提高检测灵敏度。常用的浓缩方法包括旋转蒸发、氮吹和真空浓缩等。旋转蒸发法适用于较大体积的样品浓缩，氮吹法适用于低沸点溶剂的浓缩，而真空浓缩法则适用于对热敏感的样品。浓缩后的样品通常需要定容至一定体积，以便后续的液相色谱分析。通过合理的样品前处理，可以确保AFB1的液相色谱法测定结果准确可靠。

四、4.茶黄曲霉毒素B1测定液相色谱法的操作步骤

(1)茶黄曲霉毒素B1（AFB1）的测定液相色谱法操作步骤如下：首先，将提取后的样品经过净化处理，去除杂质。然后，将净化后的样品通过液相色谱仪进行分离。液相色谱仪的流动相通常为乙腈-水溶液，流动相比例根据样品和检测条件进行调整。在分析过程中，AFB1的保留时间约为12分钟，通过紫外检测器在224nm处检测。例如，在检测花生样品中的AFB1时，流动相比例为乙腈：水=80:20，流速