1.2 发酵工程的无菌技术 第2课时(共38张PPT)苏教版高中生物学选择性必修3.pptxVIP

1.2发酵工程的无菌技术第2课时

微生物的纯培养由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。1.概念：2.内容：1）配制培养基2）灭菌（培养基和器具）3）微生物接种4）分离5）恒温箱中培养在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体称为培养物。一、平板划线法分离和纯化微生物

①酵母菌是兼性厌氧型单细胞真菌，可以进行出芽生殖，也可以进孢子生殖；②培养的最适pH为4.5～5.0，最适生长温度为28～30℃；③可以用液体培养基培养，也可以用固体培养基培养，但要获得纯化的酵母菌菌落，则需要通过固体培养基培养。走进实验室：通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落酵母菌

(1)实验目的尝试通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落。(2)实验原理①培养基能满足酵母菌生长、繁殖的营养需要；②是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法之一。马铃薯葡萄糖琼脂平板划线法(3)实验器材和试剂酵母菌样本(菌种)；接种环、酒精灯、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅；马铃薯葡萄糖琼脂培养基。走进实验室：通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落

（4）实验步骤②培养基和培养皿灭菌：放入高压蒸汽灭菌锅中，在压力为103kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15-20min。用牛皮纸包扎已配制的培养基已包好的培养皿高压蒸汽灭菌锅灭菌①配制马铃薯葡糖糖琼脂培养基并调pH＋→走进实验室：通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落

倒平板的具体操作：③倒平板：待培养基冷却至50左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。倒平板注意事项：①温度：50℃左右②操作：在酒精灯火焰附近③冷凝后平板倒置12341.拔出锥形瓶的棉塞2.将瓶口迅速通过火焰2~3次，并转动瓶口，确保瓶口灭菌3.用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（10-20mL）倒入培养皿，立即盖上皿盖4.等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒转过来放置走进实验室：通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落

走进实验室：通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落

1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。2.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？最好不要用这个平板培养微生物。防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。4.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？因为平板凝固后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，又可避免培养基中的水分过快蒸发。讨论：

平板划线法：通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面，从而获得单个菌落的方法。菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。单菌落：一般由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的纯种菌落,即单菌落。微生物群连续划线分散或稀释单个细胞单个菌落生长繁殖走进实验室：通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落④平板划线和培养

操作步骤在一个倒有培养基的培养皿的皿底外侧面中央用记号笔画一直线，再在此线中间处画一垂直线，将培养皿分成三个区域：第1区域、第2区域、第3区域，分别标上“1”“2”“3”字样。123走进实验室：通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落

接种划线时，将带有酵母菌样品的接种环，在培养皿内培养基的第1区域划线，然后再从第1区域划到第2区域，从第2区域划到第3区域（在第2次、第3次划线前，接种环需过火灭菌）。在固体培养基表面完成多次“由点到线”的逐步稀释。划完线后盖上皿盖，倒置培养。接种和划线操作需要在酒精灯火焰附近进行。走进实验室：通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落

通过培养可以得到由单个酵母菌增殖而形成的菌落。走进实验室：通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落

为什么要将平板倒置？为什么要同时放入未接种的平板？既可以防止培养基表面的水分挥发；又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染作对照，该培养皿无菌落说明培养基没有污染⑤培养酵母菌完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右(培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异)的恒温培养箱中培养24-48h。走进实验室：通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落

⑤实验结