DB33T 2408-2021 甘薯茎腐病菌检疫鉴定方法　　.docxVIP

ICS65.020.20

CCSB16

33

浙江省地方标准

DB33/T2408—2021

甘薯茎腐病菌检疫鉴定方法DetectionandidentificationofDickeyadadantii

2021-12-24发布2022-01-24实施

浙江省市场监督管理局发布

DB33/T2408—2021

I

前言

本标准按GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的要求起草。

请注意本标准的某些内容可能涉及专利。本标准的发布机构不承担识别专利的责任。

本标准由浙江省农业农村厅提出。

本标准由浙江省种植业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：浙江省植保检疫与农药管理总站、浙江大学、浙江省植物保护学会。

本标准主要起草人：楼兵干、李艳敏、沈肖玲、陆剑飞、施海萍、高其康、李国钧、张莉丽、李月红、刘丽华、仇智灵、姚海峰、王荣洲。

DB33/T2408—2021

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甘薯茎腐病菌检疫鉴定方法

1范围

本标准规定了术语与定义、缩略语、甘薯茎腐病菌PCR反应和实时荧光PCR反应体系的构成、试剂和材料、器材与设备、操作步骤和结果判定。

本标准适用于甘薯根、茎、叶等植物材料甘薯茎腐病菌的检测。2规范性引用文件

本标准没有规范性引用文件。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

甘薯茎腐病菌thepathogenofstemandrootrotofsweetpotato

引起甘薯茎腐病的病原菌，属于细菌界（Bacteria）、变形菌门（Proteobacteria）、伽玛变形菌纲（Gammaproteobacteria）、肠杆菌目（Enterobacterales）、果胶杆菌科（Pectobacteriaceae）、狄克氏菌属（Dickeya）、达旦提狄克氏菌(Dickeyadadantii)。革兰氏阴性细菌，菌体短杆状，大小约为2.36μm×0.40μm，周生鞭毛，可在烟草上激发过敏性反应（HR）。

注：症状特征见附录A。

4缩略语

下列缩略语适用于本标准。bp：碱基对（Basepair）

CFU：菌落形成单位（Colony-FormingUnit）

CTAB：溴代十六烷基三甲胺（Cetyltrimethylammoniumbromide）DNA：脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleicacid）

dNTP：脱氧核苷三磷酸（Deoxyribonucleosidetriphosphate）HR：过敏性反应(HypersensitiveReaction)

MALDI-TOFMS：软电离高分辨飞行时间串联质谱仪（Matrixassistedlaserdesorptionionization-timeofflight-massspectrometry）

NA：营养琼脂（NutrientAgar）

NGM：营养琼脂甘油培养基（NutrientAgarGlycerolMedia）PCR：聚合酶链式反应（Polymerasechainreaction）

RT-PCR：逆转录-聚合酶链式反应（Reversetranscriptionpolymerasechainreaction）Taq：水生噬热杆菌（Thermusaquaticus）

DB33/T2408—2021

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5方法原理

根据甘薯茎腐病的菌落形态特征、田间危害症状特征、分子生物学PCR或RT-PCR反应特征、蛋白质指纹图谱特征和致病性测试结果等进行检测鉴定。

6试剂或材料

6.175%乙醇。

6.21%次氯酸钠。

6.3蛋白胨。

6.4牛肉浸膏。

6.5氯化钠。

6.6琼脂粉。

6.7蔗糖。

6.8NA、NGM培养基配方，培养基配比按附录B执行。

6.9PCR凝胶电泳检测试剂，制备方法按附录C执行。

6.10实时荧光PCR检测试剂，制备方法按附录D执行。

7仪器设备

7.1普通冰箱。

7.2超低温冰箱：最低可设定温度-80℃。

7.3台式小型离心机。

7.4低温高速离心机。

7.5PCR仪。

7.6实时荧光定量PCR仪。

7.7电泳仪。

7.8水平电泳槽。

7.9凝胶成像分析仪。

7.10微波炉。

7.11电子天平：最小分度值为1mg。

7.12显微镜。

7.13恒温