微生物的分离与纯化ppt课件.pptxVIP

实验一、微生物的分离与纯化

一、培养基的制备与灭菌

1.牛肉膏蛋白胨培养基（细菌）

2.高氏1号培养基（放线菌）

3.马丁氏培养基（真菌）

二、土壤微生物的分离、纯化

实验目的

1、熟悉培养基制作原理；

2、通过对几种培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤；

3、了解加压蒸汽灭菌的原理，并掌握其具体操作方法；

4、了解土壤微生物的分离纯化的基本原理；

5、学习并掌握微生物分离纯化技术方法。

一、培养基的制备与灭菌

培养基是人工配制的微生物生活环境，其主要用途是繁殖及分离接种微生物，传代或保存微生物，鉴别微生物的类属，研究微生物的生理及生化特性，制造菌苗、疫苗或其他微生物制剂等。其营养成分包括微生物生长所需要的水分、碳源、氮源、无机盐及某些生长因子（维生素、辅酶）等。

二、实验原理

1、满足微生物生长培养所需的营养要素：

碳源、氮源、无机盐、维生素、生长因子等

2、合适PH值

3、抑制其它微生物生长的物质。

分类

主要用于增菌

用于检测动力及保存菌种

用于分离鉴定细菌

分类

三糖铁培养基

SS培养基

普通琼脂培养基

血液琼脂培养基

庖肉培养基

细菌过滤器

用于滤过除菌的各式滤器

手提式灭菌锅

坐式灭菌锅

高压蒸汽灭菌器

卧式灭菌锅

三、实验器材

1、试剂：牛肉膏、蛋白胨、可溶性淀粉、NaCl、PH试纸、琼脂、葡萄糖、孟加拉红、FeSO4·7H20、MgSO4·7H20、KNO3、K2PO3·3H20

2.仪器及其它

试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻棒、天平、药匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸(5.5-9.0)、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、干燥箱、培养皿、涂布棒、吸管（1ml）、玻璃珠

四、实验方法和步骤

1、微生物常用玻璃仪器的包扎和棉塞的制作

培养皿的包装每10套一包，用旧报纸包扎

（或放在特制铁皮圆筒里，加盖扣严）。

吸管的包装首先在吸管的上端塞上一小段棉花，用长纸条包扎、打结。

玻璃涂布棒的包装方法同吸管的包装。

三角瓶的包扎

1.牛肉膏蛋白胨培养基的制备

（1）计算

（2）称量准确称取各种成分。

（3）溶解向烧杯内加入所需的水量，将牛肉膏用水洗下后，取出硫酸纸弃去。加热搅拌全溶后稍放冷。

（4）调pH值用酸度计或精密pH试纸测定其pH值，并用10％NaOH调至所需pH值，必要时用滤纸或脱脂棉过滤。一般比要求的pH高出0.2，因为高压蒸汽灭菌后，pH常降低。

（5）分装根据不同需要，可将配好的培养基分装入配有棉塞的试管或三角瓶内（附图1-1）

（6）包扎试管扎成捆。

（7）灭菌高压蒸汽灭菌15~20min。

1、牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏3.0g、蛋白胨10g、NaCl5.0g、水1000ml、PH7.4-7.6

2、高氏1号培养基（放线菌）

可溶性淀粉20g、NaCl0.5g、琼脂15-20g、FeSO4·7H200.01g、MgSO4·7H200.5g、KNO31g、K2PO4·3H200.5g、水1000ml、PH7.4-7.6

3、马丁氏培养基（真菌）

KH2PO41g、MgSO4·7H200.5g、蛋白胨5g、葡萄糖10g、琼脂15-20g、水1000ml、PH

2.培养基的制备与分装

（1）三角瓶固体培养基的制备

1.称量按培养基配方比例依次准确地称取药品，放入在瓷缸内。（注意药品称量顺序）

2.加入定量的琼脂、水，煮沸，溶解

3.完全溶解后，补充水分，调pH值（不要调过头）

4.分装置三角瓶中，注意装液量

5.加棉塞，包扎，高压蒸汽灭菌,121℃,0.10Mpa,20min

（2）试管斜面固体培养基的制备

a.称量按培养基配方比例依次准确地称取药品，放入在瓷缸内。（注意药品称量顺序）

b.加入定量的琼脂、水，煮沸，溶解

c.完全溶解后，补充水分，调pH值

d.在培养基未融化之前，用10mL移液管快速加入试管内，每根7-8mL，塞上棉塞，包扎，灭菌，灭菌完后摆斜面。

3.培养基、无菌水、器皿的灭菌

1.将培养基、无菌水放入高压蒸汽灭菌锅内，湿热灭菌。

2.灭菌完毕，将试管培养基搁成斜面。

3.器皿放入干热灭菌箱内，加热灭菌。

二、土壤微生物的分离、纯化

土壤是微生物生活的大本营，其中含有大量不同类型的微生物，可按照一定的方法将各类微生物通过分离进行纯培养，并能对特定类群进行数量测定。

基本原理：是通过稀释使菌体细胞充分分散，单细胞得以生长发育形成菌落，可使用稀释法或平板划线法进一步纯化，还可通过平板菌落计数，推算单位重量土壤样品含有微生物的数量。

实验步骤：

1、采样一般定点于耕作层0--20cm，先除去表土1--2cm，以无