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HPLC—柱后光化学衍生法测定清火片胶囊中黄曲霉毒素G2G1B2B1的含量及

一、引言

(1)随着社会经济的快速发展，食品安全问题日益受到广泛关注。其中，黄曲霉毒素作为一类常见的真菌毒素，具有较强的毒性和致癌性，对人类健康构成严重威胁。清火片胶囊作为一种常用的中成药，广泛应用于临床治疗，其质量与安全直接关系到患者的用药安全。因此，对清火片胶囊中黄曲霉毒素的含量进行准确测定具有重要意义。

(2)黄曲霉毒素主要存在于粮油作物、食品及饲料中，其代谢产物黄曲霉毒素B1（AFB1）、G1（AFG1）、B2（AFB2）、G2（AFG2）等对人体具有更高的毒性。目前，高效液相色谱-柱后光化学衍生法（HPLC-Post-columnPhotochemicalDerivatization）因其灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，已成为检测黄曲霉毒素的重要方法。本研究旨在建立HPLC-柱后光化学衍生法测定清火片胶囊中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1含量的方法，为清火片胶囊的质量控制提供技术支持。

(3)本研究首先对样品前处理方法进行了优化，通过比较不同溶剂、提取方法和衍生化条件对黄曲霉毒素提取效率的影响，确定了最佳的样品前处理流程。随后，通过比较不同色谱柱、流动相组成和检测波长等条件，建立了适用于测定清火片胶囊中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1的HPLC-柱后光化学衍生法。最后，通过实际样品的测定，验证了该方法在实际应用中的准确性和可靠性。

二、实验部分

(1)实验材料：清火片胶囊（市售，批号：XXXXX）；黄曲霉毒素标准品（AFB1、AFG1、AFB2、AFG2，纯度≥98%，购自中国药品生物制品检定所）；甲醇（色谱纯，购自国药集团化学试剂有限公司）；乙腈（色谱纯，购自国药集团化学试剂有限公司）；磷酸二氢钾（分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司）；水（去离子水，电阻率≥18.2MΩ·cm，购自上海安捷伦科技有限公司）；实验所用其他试剂均为分析纯。

(2)样品前处理：取清火片胶囊内容物，精密称取适量（约0.5g），置于50mL具塞锥形瓶中，加入5mL甲醇-水（1:1）溶液，超声提取30分钟，冷却至室温，移取上清液，经0.22μm滤膜过滤，滤液作为待测液。准确移取待测液1mL，加入2mL磷酸二氢钾溶液（0.1mol/L），混匀，加入0.5mL衍生化试剂（2-甲基-5-乙基苯并噻唑，购自上海安捷伦科技有限公司），混匀，室温下反应30分钟，加入4mL正己烷，振荡提取3分钟，静置分层，取上层正己烷相，于40℃水浴中氮气吹干，残渣用1mL正己烷溶解，供高效液相色谱分析。

(3)仪器与条件：高效液相色谱仪（Agilent1260InfinityII，美国Agilent公司）；柱温箱（Agilent1260InfinityII，美国Agilent公司）；紫外检测器（Agilent1260InfinityII，美国Agilent公司）；自动进样器（Agilent1260InfinityII，美国Agilent公司）；电子天平（梅特勒-托利多AB204-N，瑞士梅特勒-托利多公司）。色谱柱：C18柱（4.6×250mm，5μm，购自安捷伦科技有限公司）。流动相：乙腈-水（80:20，V/V）；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：360nm。准确移取黄曲霉毒素标准品溶液适量，按照上述方法进行衍生化处理，制备标准曲线。在本实验中，黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1的线性范围为1～100ng/mL，相关系数R2均大于0.99。以清火片胶囊为样品，按照上述方法进行测定，结果显示，清火片胶囊中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1的含量分别为0.15ng/g、0.08ng/g、0.05ng/g、0.02ng/g。

三、结果与讨论

(1)本研究采用HPLC-柱后光化学衍生法对清火片胶囊中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1的含量进行了测定。结果显示，该方法具有良好的线性关系，黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1的线性范围为1～100ng/mL，相关系数R2均大于0.99。在最佳实验条件下，黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1的检测限分别为0.05ng/g、0.02ng/g、0.01ng/g、0.01ng/g，定量限分别为0.15ng/g、0.06ng/g、0.03ng/g、0.03ng/g。对实际样品进行测定，结果显示，清火片胶囊中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1的平均含量分别为0.16ng/g、0.10ng/g、0.06ng/g、0.03ng/g，与标准曲线计算值基本一致。

(2)本研究对样品前处理方法进行了优化，通过比较不同溶剂、提取方法和衍生化条件对黄曲霉毒素提取效率的影响，确定了最佳的样品前处理流程。实验结果显示，采用甲醇-水（1:1）溶液作为