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重组DNA的基本步骤.pptVIP

重组DNA的基本步骤.ppt

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    重组DNA的基本步骤

    重组DNA的基本步骤获得目的基因DNA分子的体外重组重组DNA分子引入宿主细胞和筛选鉴定

    BDAC限制性内切酶酶切产生待克隆的DNA片段反转录酶酶促合成法人工合成DNA聚合酶链(式)反应扩增特定的基因片段获得目的基因的途径

    限制性内切酶对DNA的切割方式有两种，一种切割方式是完全酶切，另一种方式为部分酶切。

    平齐末端连接法：01用化学合成法、逆转录酶酶促合成法获得的DNA片段或cDNA片段，以及某些限制酶酶切产生的DNA片段，称为平齐末端。固然平齐末端可用T4DNA连接酶连接，所需底物的浓度高，效率低。因此通常要将平齐末端改造成黏性末端后再行连接。改造的方法是加人工接头或结尾02

    这一过程分为两个步骤01重组DNA引入宿主细胞02重组体克隆的筛选与鉴定03

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