细胞内化学组分测.ppt

放射自显影成像图片用途放射自显影术（radioautography）用于研究标记化合物在机体、组织和细胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用机理、作用部位等等。PARTONE应用举例研究药物、营养物质、毒物在器官、组织、细胞中的分布、运转，以及分析其合成、更新、蓄积作用机理等。研究特异性标记前体（如胸腺嘧啶核苷酸DNA前体）的渗入部位、特点、影响因素等，探讨生物活性分子代谢部位机理。标记抗体或药物在离体那个同位素标记。标本上显示抗原或抗体位置，祚定位示踪。用于核算中碱基程序的检测—原位杂交时其探针用同位素标记。特点定位精确，灵敏度高，分辨率好，能保存相当长时间；操作简便，无需复杂设备；可供定量研究和双同位素示踪；将形态、机能和代谢地研究统一起来；研究某些大分子在体内地动态变化过程。免疫组织化学技术免疫组织化学技术是用显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项技术。PARTONE原理先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半抗原去免疫小鼠等实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体（第一抗体）作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并用某种酶（常用辣根过氧化物酶）或生物素等处理后再与前述抗原成分结合，将抗原放大，由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的，因此，还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来（常用显色剂DAB显示为棕黄色颗粒）。通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。常用免疫组织化学方法的原理1、免疫荧光方法是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用比较广。常用免疫组织化学方法的原理2、免疫酶标方法免疫酶标方法是继免疫荧光后，于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前最常用的技术。本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是：定位准确，对比度好，染色标本可长期保存，适合于光、电镜研究等。细胞内化学组分测定分析技术流式细胞技术（FlowCytometry,FCM）放射自显影技术（radioautography）免疫组织化学技术流式细胞技术（FCM）流式细胞技术（FlowCytometry,FCM）是利用流式细胞仪对处在快速、直线、流动状态中的单细胞生物颗粒进行多参数、快速定量分析，同时对特定群体加以分选的现代细胞分析技术。流式细胞仪（FlowCytometer）集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机技术、细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的一种新型高科技技术。流式细胞计基本结构流式细胞计的基本结构流式细胞计主要由四部分组成。它们是：流动室和液流系统；光电管和检测系统；计算机和分析系统。激光源和光学系统；原理待测样品(如细胞、染色体、精子或细菌等)经荧光染料染色后制成样品悬液，在一定压力下通过壳液包围的进样管而进入流动室，排成单列的细胞，由流动室的喷嘴喷出而成为细胞液流，并与入射激光束相交。细胞被激发而产生荧光，由放在与入射的激光束和细胞液流成90°处的光学系统收集之。光学系统中的阻断滤片用于阻挡激发光；二色分光镜及另一些阻断滤片则用于选择荧光波长。荧光检测器为光电倍增管。散射光检测器是光电二极管，用以收集前向散射光。小角度前向散射与细胞大小有关。激光光源光收集系统：滤光片光收集系统：光电倍增管液流系统：流动室、液流驱动系统细胞分选系统科研型（大型机）FACSVantageDiva应用举例流式细胞术在细胞生物学、分子遗传学、微生物学、免疫学、分子生物学以及临床肿瘤学、临床血液学等诸多领域都有广泛应用：PARTONE在细胞生物学方面的应用细胞生物学是FCM应用最广泛也是最基本的领域，细胞周期分析是其基本分析内容之一，而实施的技术途径是通过测定细胞周期各时相的DNA含量来达到的。在免疫学方面的应用：FCM以它的快速、灵活及定量的特点被广泛地应用于免疫学的基础研究和临床应用的各个方面，尤其是结合单克隆抗体技术，在