酶促反应的机制.ppt

Dixon作图2，非竞争性抑制作用0102非竞争性抑制的反应式竞争酶的活性中心以外的必须基团非竞争性抑制的双倒数作图法非竞争性抑制的Hanes-Woolf作图法酶促反应具有极高的效率降低活化能酶促反应具有高度的特异性绝对专一性相对专一性立体异构专一性酶促反应的可调节性一、酶促反应的特点酶与底物复合物的形成与酶促反应的机制诱导契合假说邻近效应与定向排列多元催化表面效应二、酶促反应的机制诱导契合假说酶促反应动力学是研究梅促反应速度及其影响因素的。因素包括：酶浓度，底物浓度，pH，温度，抑制剂和激动剂等。第二节酶促反应动力学一、底物浓度对反应速度的影响米氏方程的修正[ES]的生成速度=k1[E]·[S][ES]的分解速度=k-1[ES]+kcat·[ES]=k1([E]total-[ES])·[S]k1([E]total-[ES])·[S]=k-1[ES]+kcat·[ES]经整理：∴[ES]= =设：Km=k1·[E]total·[S]k1·[S]+k-1+kcat[E]total·[S]k-1+kcatk1+[S]k-1+kcatk11则：当反应速度达到最大反应速度的一半时：Km=[S]2v=kcat·[ES]=3kcat·[E]total·[S]4Km+[S]V0=kcat[ES]. (2)[ES]=[E]total. （最大反应速度应该是所有酶均与底物结合时的速度）Vmax=kcat[E]total. (3)米氏方程的推导010302k1[E]·[S]=k-1[ES]04与逆反应速度：05正反应速度为：Vf=k1[E]·[S]01在反应达到平衡时，正反应速度等03逆反应速度为：Vr=k-1[ES]02自由酶浓度等于总酶浓度减去结合酶 k1([E]total-[ES])·[S]=k-1[ES] ([E]total-[ES])·[S] k-1 [ES] k1==Ks∴[ES]=[E]total·[S]Ks+[S]v=kcat·[ES]=kcat·[E]total·[S]Ks+[S]∵Vmax=kcat·[E]total∴v=当[S]Ks时，v≈Vmax当[S]Ks时，v≈ Vmax·[S]Ks+[S]Vmax·[S]Ks与[S]成正比0102Km应速度1，反应速度达到最大反应速度一半是的底物浓度2，表示酶和底物的亲和程度3，km是酶的特征常数之一Vmax是酶完全被底物饱和时的反Km和Vmax的意义双倒数作图法双倒数作图法1/[S]Hanes-Woolf作图法Eadie-Hofstee作图法

（v对v/[S]作图法）Vmax对Km作图法表2－1四种作图法特征比较作图方式斜率纵轴截距横轴截距1/v～1/[S]Km/Vmax1/Vmax-1/Km[S]/v～[S]1/VmaxKm/Vmax-Kmv～v/[S]-KmVmaxVmax/KmVmax～Kmv/[S]v[S]随着酶浓度的增加，反应速度成正比变化。二、酶浓度对反应速度的影响三、温度对酶促反应的影响四、pH对酶促反应的影响抑制剂：凡是能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白变性的物质。不可逆性抑制可逆性抑制五、抑制剂对反应速度的影响不可逆性抑制：抑制剂通常与酶1的活性中心上的必需基团以共价2键结合，使酶失活。3不能用透析，超滤等方法除去。4（一）不可逆性抑制农药可使酶失活解磷定可以解毒AEDFBC通过非共价键结合，使酶失活。能用透析，超滤等方法除去。非竞争性抑制作用竞争性抑制作用反竞争性抑制作用可逆性抑制：抑制剂通常与酶（二）可逆性抑制1，竞争性抑制作用竞争性抑制的反应式0102竞争酶的活性中心PABA磺胺类药物竞争性抑制酶的活性FH2竞争性抑制作用竞争性抑制的动力学关系12竞争性抑制的双倒数作图法竞争性抑制的Hanes-Woolf作图法Km值增大竞争性抑制剂存在时，Vmax不变，第三章酶酶是生物催化剂