化学诱导表达载体pKIGW在拟南芥中的应用.pdfVIP

化学诱导表达载体pKIGW在拟南芥中的应用--第1页

化学诱导表达载体pKIGW在拟南芥中的应用

丁博;钟思林;王俊斌;李明;谢晓东

【摘要】为了评价pKIGW载体在模式植物拟南芥中的可用性和稳定性,利用拟南

芥转基因纯系植株,对其施加诱导物后,进行GUS染色并进行实时定量PCR试验.结

果表明:GUS染色后发现转基因植株幼苗各器官均被染成蓝色,实时定量试验证明,

目的基因在地塞米松诱导后,表达水平急剧上升.结论:该系统可精确控制目的基因的

表达,基因功能分析的结果更可靠,是理想的基因功能鉴定表达载体.

【期刊名称】《贵州农业科学》

【年(卷),期】2013(041)010

【总页数】5页(P11-13,18,封3)

【关键词】pKIGW;地塞米松;化学诱导;拟南芥

【作者】丁博;钟思林;王俊斌;李明;谢晓东

【作者单位】天津农学院农学系,天津-布里斯托环境变化对作物影响研究中心,天津

300384;美国康奈尔大学,BoyceThompson植物研究所,美国纽约14853;天津农

学院基础科学系,天津300384;天津农学院农学系,天津-布里斯托环境变化对作物影

响研究中心,天津300384;天津农学院农学系,天津-布里斯托环境变化对作物影响研

究中心,天津300384

【正文语种】中文

【中图分类】S131;Q786

化学诱导表达载体pKIGW在拟南芥中的应用--第1页

化学诱导表达载体pKIGW在拟南芥中的应用--第2页

转基因植物中目的基因的组成型超量表达，通常会对植物生长发育有害，并且在进

行一些生理和发育方面的研究时需要目的基因的短暂表达。目前，人们对特异表达

启动子的研究和应用越来越重视，已发现的特异型启动子主要包括组织器官型启动

子和诱导型启动子[1]。其中，诱导型启动子平时不启动转录或转录活性很低，但

在某些特定的物理或化学信号的刺激下，转录活性能够显著地提高[2]。例如，光、

温度等的诱导启动子和植物激素诱导表达的启动子等。诱导型启动子使得特定基因

的转录更为灵活，具有时空性，可以使目的基因在植物体内不同部位和植物发育的

不同阶段进行表达[3]。

化学诱导表达系统是近20年来发展和完善起来的一种调控基因表达技术手段。化

学诱导表达系统需要2个转录单位组成，第一个转录单位由一个组成型启动子(如

CaMV35S)转录一个对化学诱导剂敏感的转录因子，第二个转录单位含有多个能

结合转录因子的位点与一个基本植物启动子(如截短的CaMV35S)组成的嵌合型

启动子调控目的基因的表达[4]。

由地塞米松诱导的pOp6/LhGR系统来源于转录激活系统pOp/LhG4[5]，

pOp6/LhGR系统是Craft等[6]将LhG4与老鼠GR的配体结合域融合而形成的一

种化学诱导系统。pOp启动子的乳糖操纵子序列增加到6个，此系统在地塞米松

存在的情况下被诱导而使目的基因得以转录。LhGR系统只需2μmol/L地塞米松

即可达到最大诱导水平，半诱导水平需要0.2μmol/L在培养条件下,需要每5～7

d替换10μmol/L诱导物来维持最大诱导水平[7]。此系统是一个相对比较新的系

统，已成功在细胞分裂素生物合成基因的诱导表达RNA干扰、转录因子蛋白激酶

和激活抑制等得到应用。

该试验研究的植物表达载体pKIGW由SilinZhong博士构建，将Gateway元件

与pOp6/LhGR系统结合起来，用于目的基因超量表达的表型鉴定。在转基因株

化学诱导表达载体pKIGW在拟