血清谷丙转氨酶.ppt

血清谷丙转氨酶

活性的测定实验题目实验目的掌握谷丙转氨酶活性测定的原理和方法实验原理血清谷丙转氨酶作用于由丙氨酸及a一酮戊二酸组成的基质。产生丙酮酸及谷氨酸血清加基液保温后产生丙酮酸的多少，即反应出谷丙转氨酶活性的大小。丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在酸性溶液中显黄色，在碱性溶液中成醌型显棕红色。本实验是在碱性条件下，生成醌类化合物的量反应丙酮酸的量，即反应了谷丙转氨酶的活性。本法以lml血清与基质液在37℃，保温30分钟生成2.5μg丙酮酸为谷丙转氨酶活性1单位求酶活性单位的方法：标准品对照法：检品与标准丙酮酸液同样处理呈色，进行比色，计算出酶活性单位。标准曲线法：取含待测物的一系列标准溶液，作标准曲线，由标准曲线查得活性单位。32145基质液血清丙酮酸水4个管同时放入37℃水浴中。准确保温30分钟，呈色试剂基质液A（检品）0.50.1——0.5—B（检对照）—0.1——0.50.5S（标准）0.5—0.1—0.5—S’（标对照）———0.10.50.5实验操作标准品对照法

取试管4支，标号，按下表加试剂：56℃放置5分钟。加0.4NNaOH液5.0ml慢慢加入（约1分钟），边加边混匀。1室温放置30分钟，2测OD值，波长520nm，用蒸馏水调零点。3计算（ODA-ODB）（ODs-ODs＇）=X（待测样品丙酮酸含量）50ug/ml×0.1mlX=（ODA-ODB）（ODs-ODs＇）×5SGPT单位=（ODA-ODB）（ODs-ODs＇）×50.12.5×=（ODA-ODB）（ODs-ODs＇）×20二、标准曲线法配制一系列不同浓度的标准丙酮酸液，并且各加以适量的基质液，作成标准曲线。具体做法如下表。管号12345空白标准丙酮酸（50μg/ml）基质液ml蒸馏水ml丙酮酸含量μg相当GPT单位0.050.50.452.5100.10.50.45.0200.20.50.310400.30.50.215600.40.50.12080-0.50.5-0。各管混匀，放37℃水浴5分钟室温放置30分钟然后各加呈色试剂0.5ml，混匀56℃放置5分钟。测定OD值,波长520nm，用蒸馏水调零点。加0.4NNaOH液5.0ml慢慢加入（约1分钟），边加边混匀*