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荧光定量PCR基础知识

目录

荧光定量PCR基础知识（1）．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

荧光定量PCR概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.1荧光定量PCR的定义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.2荧光定量PCR的历史与发展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.3荧光定量PCR的应用领域．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

荧光定量PCR原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

2.1DNA复制原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8

2.2荧光标记与检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

2.3定量分析原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

荧光定量PCR仪器与试剂．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

荧光定量PCR实验步骤．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

4.1样本处理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

4.2引物设计与合成．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

荧光定量PCR质量控制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16

5.1实验室质量控制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

5.2数据质量控制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18

5.3实验结果评估．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

荧光定量PCR常见问题与解决方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

6.1PCR反应失败的原因．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

6.2背景荧光过高的原因．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

6.3定量结果不准确的原因．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24

6.4常见问题解答．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

荧光定量PCR新技术与发展趋势．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26

荧光定量PCR基础知识（2）．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

荧光定量PCR概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

1.1荧光定量PCR的定义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

1.2荧光定量PCR的应用领域．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

1.3荧光定量PCR与传统PCR的区别．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

荧光定量PCR原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

2.1荧光定量PCR的基本原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

2.2荧光定量PCR的定量方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34

荧光定量PCR实验流程．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34

3.1实验准备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35

3.1.1实验材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37

3.1.2实验仪器．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37

3.1.3实验试剂．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38

3.2样本处理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40

3.3引物设计与合成．．．．．．．．．．．．．．．．．．