有声 （1）PCR原理及反应体系20140904.pdf

PCR原理和反应体系

1.PCR的概念

PCRpolymerasechainreaction

•就是利用DNA聚合酶在试管中

合成DNA的技术•单链DNA模板

•能提供游离3-OH的引物

•底物4dNTP

•合适的条件：温度、离子环境

g-c-t-a-c-gPol.

3-t-t-a-c-g-t-a-c-a-tHO--5

5--3

2.PCR的基本原理

•利用DNA复制的基本特性

在

•用理化方法替代体内一些酶促反应试

管

—打开双链热变性中

—单链模板的维持

合

—寡核苷酸引物化学合成成

•利用DNA聚合酶，尤其耐热TaqDNA聚合酶D

N

•模板DNA提供序列信息A

1）温度DNA结构PCR流程

2）PCR的第1-3循环95℃

模板DNA

95℃

引物1

DNA引物

引物250℃

Taq酶

引物1

DNA引物72℃

引物2

Taq酶

72℃

第1轮结束

第2轮开始

95℃

Taq酶

Taq酶

50℃

72℃