食品微生物实验.ppt

实验原理在接种过放线菌的琼脂平板上，插上盖玻片或在平板上开槽接种后在搭上盖玻片，放线菌的菌丝体可沿着培养基与盖玻片的交界线蔓延生长，从而较容易地黏附在盖玻片上。待培养物成熟后再轻轻地取出盖玻片，就能获得在自然状态下生长的直观标本。将它置于载玻片上（让含培养物的面朝上）做显微镜检查，就可观察到放线菌在自然状态下着生的菌丝体的各种形态特征。菌种：放线菌、黑曲霉。01染色液：高氏1号琼脂培养基，PDA培养基。02器材：培养皿，盖玻片，镊子，载玻片，接种环，擦镜纸，酒精灯，显微镜。03实验器材01020304观察放线菌的形态特征常用的方法：插片法搭片法玻璃纸法05压片法实验方法插片法：1）倒平板：融化高氏1号培养基，冷却至50℃左右倒平板。平板宜厚些（利于插盖玻片，每皿倒入约20ml培养基）。冷凝待用。2）两种插片法：先划线接种后插片与先插片后划线接种。1.先接种后插片：用接种环以无菌操作法从斜面菌种上挑取少量孢子，在平板培养基的一侧作来回划线接种。接种量可适当多些，然后以无菌操作法在接种线处插入无菌盖玻片（常以40°-50°角插入，深度约为盖玻片的1/3长度）即可。实验方法菌种划线盖玻片2.先插片后接种实验方法用无菌镊子取无菌盖玻片，在平板培养基的另一侧先插上无菌盖玻片，然后在交界线上接种（接种线长约为盖玻片的一半，即在盖玻片两端留有空白，因为放线菌的菌丝会向两边蔓延生长）。以此法制备的片子，可省略镜检时先要擦去盖玻片另一面菌丝体的操作步骤。盖玻片菌种划线可在交界处划一条线标记用镊子小心取出盖玻片，并将其背面附着的菌丝体擦净（先插片后接种的可省略）。然后将玻片无菌丝体的面放在洁净的载玻片上，用低倍镜、高倍镜或油镜观察。4）镜检将插片平板倒置于28℃温箱中培养3-7天。3）培养贰壹实验方法实验结果霉菌的培养与观察：倒平板：每皿约15mL培养基三点接种培养：28℃，3~7d镜检：挑取菌落边缘菌丝，放置于载玻片上（预先加1d水或乳酸石炭酸棉蓝），用针适当挑开菌丝，盖上盖玻片，用低高倍镜进行观察。尽量避免挑断菌丝，可适当挑取培养基“挖”实验方法观察黑曲霉菌丝分隔情况和分生孢子着生情况（着重辨认分生孢子梗、分生孢子）实验结果实验结果分生孢子小梗梗基分生孢子梗青霉镜检时请特别注意放线菌的基内菌丝、气生菌丝的粗细和色泽差异。01挑取霉菌时，应尽量避免挑段菌丝，可适当挑取培养基。02观察时，应先用低倍镜沿着琼脂块的边缘寻找合适的生长区，然后再换高倍镜仔细观察有关构造并绘图。03注意事项思考题镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝？放线菌的菌落形态霉菌的三点接种实验七微生物显微镜直接计数法学习使用血细胞计数板计酵母菌细胞的原理和方法。了解微生物细胞活体染色的原理和计数的方法。实验目的实验原理利用血细胞计数板计数的原理将经过适当稀释的微生物细胞或孢子悬液，加至血细胞计数板的计数室中，在显微镜下逐格计数。由于计数室的容积是固定的。（0.1mm3）故可将在显微镜下计得的菌体细胞数换算成单位体积试样中的含菌量。此法所计得数值为样品中的死菌数和活菌数的总和，故称其为总菌计数法。实验原理血球计数板是一块特制的载玻片，其上四条纵槽构成了三个平台，中间的平台比两边的平台低0.1mm，此平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分成9个大方格，中央的大方格为计数室。计数室边长1mm，共有400个小方格，加盖玻片于突起部分上时，即形成一个体积为0.1mm3的计数室。计数室的规格有两种：一种是25个中方格×16个小格，另一种是16个中方格×25个小格，所以小方格的总数是相同的，都为400个。实验原理在计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上16或25，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成1ml菌液中的总菌数。如果设五个中方格的总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中的总菌数即（0.1mm3中的总菌数）为A／5×16(或25)×B。所以1ml菌液中的总菌数=A／5×16（或25）×10×1000×B。美蓝是常用的活体染色染料，当它处于氧化态时呈蓝色，还原态时为无色。美蓝进行活体染色时，由于活细胞代谢过程中的脱氢作用，美蓝接受氢后就由氧化态转变成还原态，因此活细胞呈现为无色，而衰老或死亡的细胞由于代谢缓慢或停止，不能使美蓝还原，故细胞呈淡蓝色或蓝色。实验原理死活细胞鉴别原理01美蓝（氧化型）蓝色02酵母活细胞03新陈代谢04还原能力05美