血清学诊断技术.ppt

血清平板凝集试验231细菌性颗粒抗原与相应的抗体结合,在适当的电解质参与下,经过一段时间抗原颗粒相互凝集成肉眼可见团快.常用已知细菌性抗原检测相应的凝集抗体凝集试验包括：试管凝集反应、平板凝集反应全血平板凝集反应、血清平板凝集反应）.一原理01020304适用范围鸡白痢、鸡伤寒鸡毒支原体、滑液囊支原体鸡副嗜血杆菌病（鸡传染性鼻炎）凝集抗原、阳性、阴性血清载玻片，25℃灯箱被检血清，移液器（5—50ul）010203三器材准备试验前20分钟自4℃冰箱取出抗原;阴、阳性血清和被检血清;使其达到室温，并将抗原液振荡均匀四操作程序试验过程灯箱附近不断晃动玻片2分钟，观察有无凝集涂布成2cm大小的片状取抗原液25ul滴于载玻片上快速用牙签将血清与抗原混匀.迅速在抗原液上滴加等量的被检血清结果判定分钟内出现明显凝集（背景透亮）为阳性;背景均匀一致呈混浊样，无凝集者为阴性.STEP3STEP2STEP1鸡白痢沙门氏菌的平板凝集试验的观察阴性阳性PARTONE新城疫病毒、

禽流感病毒的分离和鉴定中国农大动物医学院中国农大动物医学院

鸡病血清学检验也可以用已知标准抗体对分离的病毒进行鉴定.许多病毒具有凝集动物红细胞的能力,这种凝集能力可被相应的抗体所抑制,故可用已知病毒检测相应的血凝抑制抗体.一原理红细胞凝集抑制试验使用范围新城疫、禽流感、减蛋综合征、鸡毒支原体、滑液囊支原体等病原微生物感染后的抗体检测；或相应病原分离后的鉴定器材血凝板、微量移液器标准抗原1%红细胞悬浮液被检血清稀释液010.5％――１％红细胞的准备02阿氏液(抗凝剂)的配制03葡萄糖1.866ｇ04柠檬酸钠0.8ｇ05柠檬酸0.055ｇ06氯化钠0.418g07蒸馏水100ml08混匀放入100ml葡萄糖瓶内，10磅115度10分钟09高压灭菌。冷却后4℃保存备用。作程序01取健康鸡翅静脉或心脏采血，(按阿氏液2份，血液1份）02注意:(1).两只健康的鸡血混合;03阿氏液的量要够2.采血如此反复洗涤三次，将最后一次离心后的红细胞，按1%的稀释度加入稀释液（1毫升红细胞泥加99毫升稀释液）。将血液注入离心管中，经3000转/分钟，离心5-10分钟，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的细胞加稀释液（生理盐水）洗涤，再用离心机3000转/分钟离心5-10分钟，充去上清液，再加稀释液洗涤，010201红细胞悬液的配制：注意:每只鸡应更换一个注射器，严禁交叉使用。02将被检鸡群编号登记，用消毒过的干燥注射器采血，注入洁净干燥试管内（微量法可用孔经2-3毫米塑料管由翅静脉采血），在室温中静置或离心，待血清析出后使用。01被检血清血凝抗原效价测定（操作量25ul）抗原一般以鸡新城疫II系或Lasota系作为已知抗原。来源:购买:目前也有用聚乙二醇使Lasota系病毒液浓缩，作成稳定浓缩抗原，HA效价达1：5000以上，4℃半年不变。用鸡新城疫II系或者Lasota系疫苗接种鸡胚制备抗原：01疫苗用灭菌生理盐水稀释10倍，以0.1毫升接种于10日龄的鸡胚尿囊内;02凡接种后72-120小时内死亡的鸡胚，且病变显著者，分别收获鸡胚尿囊液于消毒试管内，如有血细胞应离心（2000转/分钟）15分钟，取上清液;03作HA试验，其凝集价在1：640以上的鸡胚鸡，分装于洁净干燥的青霉素瓶中，保存于冰箱备用。042)自制:2.抗原血凝价的测定每种抗原做两排，结果取均值1).1-12孔加生理盐水25ul2).第1孔加抗原25ul，反复吹打10次吸取25ul到第2孔，依此类推倍比稀释至第11孔3).最后从第11孔吸取25ul弃去,第12孔做生理盐水对照4).所有孔加25ul1％红细胞5).将血凝板振荡1分钟新城疫病毒室温（18℃—22℃）作用30分;禽流感病毒37℃作用30分.夏季结果出现快，冬季较慢新城疫病毒时间长，温度高易发生洗脱结果判定完全凝集孔为终点将血凝板成45°角竖立观察红细胞呈泪滴状沉淀为不凝集孔底没有红细胞沉淀,红细胞均匀平铺于孔底为凝集,此孔稀释倍数为1个工作单位孔号12345