食品检验工(微生物基础).ppt

01040203培养基pH的初步调整培养基的过滤澄清培养基的分装分装琼脂斜面培养基时，分装量应以能形成2/3底层和1/3斜面的量为恰当。分装容器应预先清洗干净并经干烤消毒，以利于培养基的彻底灭菌。每批培养基应另外分装20ml培养基于一小玻璃瓶中，随该批培养基同时灭菌，以测定该批培养基最终pH之用培养基应存放于冷暗处，最好能放于普通冰箱内。放置时间不宜超过一周，倾注的平板培养基不宜超过3天。每批培养基均必须附有该批培养基制备记录副页或明显标签。培养基的保存培养基的质量测试每批培养基制备好以后，应仔细检查一遍，如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其最终pH。将全部培养基放入36±1℃恒温箱培养过夜，如发现有菌生长，即弃去。用有关的标准菌株接种1-2管或瓶培养基，培养24-48小时，如无菌生长或生长不好。应追查原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培养基即应弃去，不能使用。培养基的配制（1）称量按培养基的配方准确称取各成分，其中牛肉膏放在小烧杯里称量，其他成分放在称量纸上称量。（2）溶化用烧杯先装少许水,依次将药品倒入铝锅中，加足水，然后在电炉上加热溶化。（3）PH值用精密的PH试纸测定，并用1%氧化钠或5%盐酸调节到所需的PH值。（4）过滤趁热用纱布将培养基进行过滤。（5）分装过滤后根据不同需要，立即趁热装入试管或三角瓶等容器中。STEP1STEP2STEP3STEP4不要使培养基沾在管口，如沾上，需用干净的纱布擦干净。液体培养基：分装高度以试管的1/4左右为宜。固体培养基：分装试管，其装量为管高的1/6~1/5灭菌后制成斜面。分装三角瓶容量之一半为宜。半固体培养基：分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后，垂直待凝成半固体深层琼脂。注意事项（6）做棉塞装好培养基的试管都要加上棉塞，这样既可过滤空气，避免杂菌侵入，又可减缓培养基水分的蒸发，制棉塞的方法多种，形状各异，总原则如下：（1）用脱脂棉制作（脱脂棉花易吸水）（2）松紧适合（3）塞头不要太大，一般为球状。（7）包装试管口或三角瓶口棉塞部分，用牛皮纸扎，以防灭菌时水蒸气打湿棉塞。灭菌01020304灭菌是指杀死物品上或环境中的所有微生物。灭菌方法可分为四种：物理灭菌、机械灭菌、化学灭菌和生物灭菌。物理灭菌：1、热力灭菌：05紫外光灭菌：一般应用于无菌室和接种箱的灭菌。干热灭菌：适用于玻璃仪器，将物品放入烘箱，160~170oC，1~2小时。1火焰灭菌：适用于常用用具，如接种环、镊子等。灭菌方法是放在火焰上直接灼烧。2湿热灭菌：3高压蒸汽灭菌：适用于培养基、衣物等的灭菌。4间歇蒸汽灭菌：适用于不耐高温的培养基或无高压蒸汽灭菌锅时。5巴斯德灭菌：适用于牛乳类等不耐高温的物体。6紫外光灭菌：一般应用于无菌室和接种箱的灭菌。7高压蒸汽灭菌锅是一个耐高压又密闭的金属锅。它是利用在密闭条件下产生高压蒸汽来达到灭菌的效果。其温度在100oC以上，有强大的杀菌能力。因此它是一种用途广泛，效率高的灭菌工具。01分类：1、卧式2、立式02具体操作步骤：03加入适量自来水于灭菌锅中（至水位线）04摆入上述包装好的待灭菌的培养基，注意：不要摆得太挤，以免影响蒸汽流通和灭菌效果。05加盖旋紧螺旋，使蒸汽锅密闭不漏气（对角线均匀拧旋）06高压蒸汽灭菌待压力降至0磅时，打开排气阀，再打开锅盖，取出灭菌物。自锅中取出灭菌好的培养基，放置稍冷却后摆成斜面，而后至37oC恒温箱培养24小时，无菌生长，方可保存备用。打开放气阀，打开电源，自开始产生蒸汽后10分钟（此时蒸汽锅内的冷空气由排气阀排尽）关紧放气阀，让温度随蒸汽压力上升而上升，当达所需压力时（15磅/时2）控制热源维持所需时间（30分钟）然后停止加热，让其自然冷却。注意：压力未降至0磅时，切勿打开锅盖，否则突然降压，招致培养基沸腾，沾湿棉塞，甚至冲出管外。应用此法灭菌是否彻底的一个重要关键是在压力上升之前，必须将锅内的冷空气完全排尽，否则虽然压力表已指15磅/时，但锅内的温度还只有100oC，结果往往造成灭菌不彻底。斜面摆放示意图：无菌水的制备用10ml量筒量取9.0的自来水，装入18*180的中号试管中，用100ml量筒量取99ml的自来水装入250ml的三角瓶中，做好棉塞，用牛皮纸包好，高压灭菌，备用。移液管、培养皿的干热灭菌（1）在移液管尾部塞上少许脱脂棉花，然后用报纸条包好。（2）用报纸条包好干燥的培养皿。（3）将已包好的移液管、培