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CyclinE干扰RNA对肝癌HepG2细胞增殖和蛋白质组的影响--第1页

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内蒙古医学院学报２年旦堑Ｑ鲞笙兰塑・

论著・

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ＣｙｃｌｉｎＥ干扰ＲＮＡ对肝癌ＨｅｐＧ２细胞增殖和蛋白质组的影响

王文礼，刘婷

（１．内蒙古医学院生物化学与分子生物学教研室，内蒙古呼和浩特０１００５９）

摘要：目的：研究ｓｉＲＮＡ对ＨｅｐＧ２细胞株ｃｙｃｌｉｎＥ表达的抑制及细胞生长的影响，并用双向凝胶电泳和质谱

技术分析鉴定转染前后细胞内差异表达的蛋白质。方法：构建质粒表达载体ｐＵ６一ｃｙｃｌｉｎＥ—ｓｈＲＮＡ，稳定转染肝癌

ＨｅｐＧ２细胞株，获得ＨｅｐＧ２一ｃｙｃｌｉｎＥｓｈＲＮＡ细胞系，ＲＴ—ＰＣＲ检测ｃｙｃｌｉｎＥｍＲＮＡ表达，ＭＴＩ＂测定细胞的增殖活性，

流式细胞仪检测细胞周期。裂解、抽提ＨｅｐＧ２一ｃｙｃｌｉｎＥｓｈＲＮＡ细胞和Ｃ，期肝癌ＨｅｐＧ２细胞全蛋白，用双向电泳技

术进行分离后，用Ｐｒｏｘｐｒｅｓｓ２Ｄ分析软件对两组细胞全蛋白质表达谱进行差异分析，并应用ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ—ＭＳ和

数据库有哪些信誉好的足球投注网站鉴定差异显著的蛋白点。结果：ＨｅｐＧ２一ｃｙｃｌｉｎＥ—ｓｈＲＮＡ细胞与转染空质粒ＨｅｐＧ２细胞和未转染的

ＨｅｐＧ２细胞相比，生长速度减慢，出现Ｇｏ／Ｇ。期细胞增多，Ｇ／Ｍ和ｓ期细胞减少。双向电泳后软件分析ｃ．期肝癌

ＨｅｐＧ２细胞株平均检测到４３５±５１（ｎ：３）个蛋白点，ＨｅｐＧ２一ｃｙｃｌｉｎＥｓｈＲＮＡ细胞３７６±４４（ｎ＝３）个，匹配分析，筛

选出两组间差异６倍及以上且出现频率大于等于５０％的蛋白点２０个。应用质谱鉴定出角蛋白１９、波形蛋白、神经

多肽ｌ１３等８个Ｇ期ＨｅｐＧ２细胞高表达蛋白点。结论：在ＨｅｐＧ２细胞株中，导入ｃｙｃｌｉｎＥ—ｆ－扰ＲＮＡ，可有效抑制

ｃｙｃｌｌｎＥ的表达，进而使细胞增殖减缓，逆转其恶性表型。两纽细胞蛋白质谱有明显差异，鉴定出Ｇ期ＨｅｐＧ２细胞

高表达蛋白点８个，这些蛋白的高表达引起肿瘤的基因修饰异常、分化异常、增殖紊乱，肿瘤侵袭转移。

关键词：肝癌ＨｅｐＧ２细胞；ＲＮＡ干扰；ｃｙｃｌｉｎＥ；蛋白质组；２一ＤＥ；质谱

中图分类号：Ｑ５１文献标识码：Ａ文章编号：１００４—２１１３（２００８）０４—０２２９—０７

ＴＨＥＥＦＦＥＣＴＳｏＦＳＩＲＮＡ—ＣＹＣＬＩＮＥｏＮＣＥＬＬ

ＰＲｏＬＩＦＥＲＡＴＩｏＮＡＮＤＰＲｏＴＥｏＭＥ

ＩＮＨＥＰＡＴＯＣＥＬＬＵＬＡＲＣＡＲＣＩＮＯＭＡＨＥＰＧ２ＣＥＬＬＬＩＮＥ

ＷＡＮＧＷｅｎ—ｌｉ，ＬＩＵＴｉｎｇ

（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＭｏｌｅｃｔｄａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａＭｅｄｗａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｈｏｈｈｏｔ０１００５９Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｎｖｅＳｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｍａｌｉｌｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）ｏｆｃｙｃｌｉｎＥ

ｇｅｎｅＯｉｌｔｈｅｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈａｎｄｃｅｌｌｃｙｃｌｅｏｆＨｅｐＧ２ｃｅｌｌｓ．Ｂｙｕｓｉｎｇ