药敏试验(扩散法)操作方法.ppt

药敏试验（扩散法）操作方法

河南康星畜禽疫病诊断中心

马长宇

内容:

¨一、药物敏感试验的目的与意义

¨二、常用的药敏测定方法

¨三、试验准备及用品

¨四、药敏试验操作步骤

¨五、结果观察

¨六、影响药敏结果的因素

¨抗菌药物敏感性试验（AST，简称药敏试验）：用于测

试抗菌药物在体外对病原微生物有无抑制作用。

¨（1）MIC：体外能够抑制细菌生长的最低药物浓度，临

床医师可以根据MIC确定药物剂量。通常达到稳态的血

药峰浓度（Css）max应为MIC的4-8倍，重症感染以大于

8倍为妥。

¨（2）为方便临床给药，根据MIC提供一个定性的结果是

必要的。临床医师根据敏感、中介、耐药的提示结合

MIC可以方便地制定用药方案。

敏感（S）：表示该药物对细菌的MIC值低于常规剂量下的抗菌药物血液浓

度或组织浓度4-8倍，可以用常规剂量治愈。

中介（I）：表示该药物对细菌的MIC值接近于常规剂量给药后的血药浓度

或组织药物浓度，细菌对该药的敏感性降低，但仍可用于生理性浓集部位的

感染或使用高剂量药物进行治疗（注：必须考虑高剂量的安全性）。

耐药（R）：表示该药物对细菌的MIC值等于或高于常规剂量下药物的血液

浓度或组织浓度，细菌不能被该种药物抑制。

意义：

监测耐药性，分析耐药菌变迁，

检测病原菌对各种抗生素的敏感性，

了解某一地区致病菌的耐药变迁、

指导临床合理用药。避免盲目用药、

流行病学调查及监控，控制和预

滥用药、大剂量用药。

防耐药菌株的流行

为经验用药提供所选药物的参考依

据，可预测抗菌治疗的效果。“敏

新抗菌药的研究

感”治疗可能有效；“耐药”肯定

失败

以下情况不需进行药敏测定：

标本污染细菌，非致病菌引起已知某些抗菌药对某菌有良好的抗

菌作用且很少有耐药菌产生

0102

0304

已知细菌全部耐药的药物对营养要求高而不易生长的细菌

¨1、扩散法：纸片法、牛津杯法、打孔法等。

纸片法手工测试的方法，通过测试药物纸片在固体培养基

上的抑菌圈的大小，判断细菌对该种药物是否敏感。目前临床上

广泛使用此法。定性

¨2、稀释法：琼脂稀释法、液体稀释法（试管、微量）

通过测试细菌在含不同浓度药物培养基内的生长情况，判断

其最低抑菌浓度（MIC）。自动化仪器均采用液体稀释法为药敏

试验的方法。定量

¨3、E测定法（Etest）：

与扩散法相似，但药物包被于长塑料条上，能够精确测定

MIC值。适于一些特殊病原菌的药敏测试，但价格较为昂贵。

¨4、全自动药敏仪法：

l药品（单品药、药厂的成品药、中药）、恒温培养箱、药敏片、培养基、

平皿（直径90mm）、烧杯、蒸馏水、滤纸、打孔器（文具店有售）、

1.5麦氏比浊管配制方法：

1.048MBaCL2(1.17%W/VBaCL2.2H2O)0.5ml

2.36NH2SO4(1%,V/V)99.5ml

①将二液混合，置螺口试管中，放室温暗处保存。用前混匀。有效期为6

个月。