有哪些信誉好的足球投注网站- 1、本文档共1页，可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
Gamma-H2AX焦点形成免疫荧光检测--第1页
实验步骤
1.各组细胞分别处理后，弃培养基，PBS洗涤三次（打到壁上）。
2.多聚甲醛固定20min，4°C(4%多聚甲醛)。
3.弃多聚甲醛，PBS洗涤三次，0.2%-5%(5%浓度太大，不易溶解，2%)Triton-x（覆盖爬
片即可），破膜15min
4.弃5%Triton-x，PBS洗涤三次，5%BSA工作液，室温封闭2h。
5.Gamma-H2AX抗体（1：200）（10μl）孵育细胞，4°C过夜。在缠了封口膜的载玻片上孵
育，载玻片-封口膜-抗体-细胞-爬片（有细胞那面的朝下），孵一抗二抗都要将载玻片置
于孵育盒内，盒底铺纱布，PBS湿润。
6.PBS振荡洗涤3次，每次5min，FITC标记羊抗鼠二抗（1：1000）。室温孵育细胞2h（在
暗室操作）。
7.PBS振荡洗涤3次，每次5min，DAPI室温染色10min，PBS洗涤3次。
8.滴加抗荧光猝灭剂封片剂，指甲油封片，Niko共聚焦显微镜下观察（避光）。
溶液配制：现配现用（需准备大量PBS）
4%多聚甲醛
5%BSA工作液，取1g或2gBSA，于PBS20ml或40ml
5%Triton-x100：取1mlTriton-x100，加PBS至20ml，4°c保存备用。
2%Triton-x100:1mlTriton-x100溶于50mlPBS
细胞传至3代准备处理时直接将细胞接种至放有爬片的24孔板，接种密度，2皿-2ml-1/20
爬片在孔板底部不易取出，需用针头挑出
为使针头挑爬片更容易，可将爬片置于直径较大的六孔板中
Gamma-H2AX焦点形成免疫荧光检测--第1页
文档评论（0）