生物学实验学习课件.pptxVIP

分子生物学实验;分子生物学实验多媒体课件简介;实验一水产动物DNA提取;二、实验材料和用品;三、实验原理;主要是利用分子筛效应。琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，45℃开始形成多孔性刚性滤孔，孔径大小决定于浓度。DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。不同分子量DNA，电泳时泳动率存在差异，形成不同的区带，泳动迁移速率与分子量的对数值成反比关系。溴化乙锭（EB）可与DNA分子形成EB-DNA复合物，在紫外照射下发射荧光，强度较游离状态EB大10倍以上，且荧光强度与DNA的含量成正比。据此可以间接观察DNA。;四、实验步骤;4.室温离心：12000g，10min；;琼脂糖凝胶电泳;五、作业;实验二水产动物RNA提取;二、实验材料和用品;三、实验原理;四、实验步骤;9.取5μl测A260、A280，取5μl电泳，其余储藏于-70℃冰箱；;总RNA甲醛变性琼脂糖凝胶电泳;测比值时稀释于DEPC水使用TE溶液稀释RNA溶液;五、作业;一、实验目的;试剂：;三、实验原理;四、实验步骤;6.加150μl预冷的溶液Ⅲ，温和振荡10sec，冰浴中5-10min，离心:4℃，12000g，5min；;11.将沉淀溶于50μlTE缓冲液，储于-20℃冰箱中。;实验四DNA聚合酶链式反应(PCR);试剂：;三、实验原理;;;3’;反应物 体积/μL 终浓度

10xBuffer 2.5 1x

MgCl225mmol/L 1.51.5mmol/L

dNTP10mmol/L 0.5200μmol/L

上游引物5μM 10.2μmol/L

下游引物5μM 10.2μmol/L

DNA120-50ng

DNATaq聚合酶 0.20.5-1U

ddH2O 17.3 ;34个循环;五、作业;实验五大肠杆菌感受态细胞制备;二、实验材料和用品;三、实验原理;四、实验步骤;4.弃上清，加预冷CaCl2溶液10ml，轻轻悬浮细胞，冰上放置15-30分钟后，离心：4℃，3000g，10min；;实验六质粒转化;二、实验材料和用品;三、实验原理;某些质粒带有大肠杆菌半乳糖苷酶基因，在该基因区外引入了一段含多种单一限制酶位点的DNA序列。如果无外源DNA片段，质粒被导入lac-的大肠杆菌后，质粒携带的半乳糖苷酶基因将正常表达，产生有??性的半乳糖苷酶，加入人工底物X-gal和诱导剂IPTG后，出现蓝色的菌落。反之如果插入外源DNA片段，将使lacZ基因灭活，不能生成半乳糖苷酶，结果菌落出现白色。;四、实验步骤;4.加1mlLB液体培养基(不含Amp)，37℃振荡培养1小时进行复苏，并表达质粒编码的抗生素抗性基因(Ampr)；;;实验七钙调蛋白提取与聚丙烯酰胺凝胶电泳;二、实验材料和用品;三、实验原理;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳原理：;四、实验步骤;5.沉淀加入1倍体积的1xH缓冲液，重复匀浆；;分离胶和浓缩胶制备表;14.观察实验结果可将凝胶照相，或把凝胶置于7％乙酸中保存。;五、作业;9、春去春又回，新桃换旧符。在那桃花盛开的地方，在这醉人芬芳的季节，愿你生活像春天一样阳光，心情像桃花一样美丽，日子像桃子一样甜蜜。6月-206月-20Sunday,June7,2020

10、人的志向通常和他们的能力成正比例。11:53:2911:53:2911:536/7/202011:53:29AM

11、夫学须志也，才须学也，非学无以广才，非志无以成学。6月-2011:53:2911:53Jun-2007-Jun-20

12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。11:53:2911:53:2911:53Sunday,June7,2020

13、志不立，天下无可成之事。6月-206月-2011:53:2911:53:29June7,2020

14、ThankyouverymuchfortakingmewithyouonthatsplendidoutingtoLondon.Itwasthefirstti