新品种培育技术.ppt

3物理法电融合诱导法（Electrofusion）：利用电场来诱导细胞彼此连接成串，再施加瞬间强脉冲促使质膜发生可逆性电击穿，促进细胞融合的技术。原理：在直流电脉冲的刺激下，细胞膜或原生质体质膜表面的电荷和氧化还原电位发生改变，使异种细胞或原生质体粘合并发生质膜瞬间破裂，进而连接，直到闭和成完整的膜形成融合体。优点：融合率高、重复性与可控制性强。缺点：可能会造成不可恢复的细胞损伤。第29页,共49页，星期六，2024年，5月BLS细胞融合仪（1）聚集：在直流电脉冲的诱导下，极化产生偶极子，彼此靠近，定向排列成串球状。（2）细胞膜融合：在直流电脉冲的诱导下，原生质体膜两侧产生电势，正负电荷相吸，细胞膜变薄，触发膜的穿孔（质膜瞬间破裂）。（3）异核体：膜之间形成通道，细胞质等得以交换、融合。（4）融合细胞：细胞核融合。第30页,共49页，星期六，2024年，5月细胞融合举例2

——薄荷的电诱导融合亲本：E33、E47两个薄荷亲本原生质体（5-9×105），0.7M山梨醇。仪器：Eppendorf电转仪、融合杯（-250微升，-50微升）观察：DAPI染色：4，6-联脒-2-苯基吲哚是一种常用的荧光染料，与DNA的双链紧密结合。结合后产生的荧光基团的吸收峰是358而散射峰是461nm，正好UV（紫外光）的激发波长正好是356nm。染色标记细胞核的位置。参数：电压：1.5-3V，超过2V破裂，选1.5V。脉冲电压：0-300V。脉冲时间：30-60S，每次增加10S，40S最佳。第31页,共49页，星期六，2024年，5月第32页,共49页，星期六，2024年，5月六融合细胞筛选因融合的随机性而成为细胞融合的关键而必需的技术。1筛选的原因与必要性细胞融合是一个随机的物理过程，经融合后细胞将以多种形式出现，需要通过培养和筛选，除去不需要的细胞，分离出需要的杂种细胞，从而解决融合细胞的选择问题。第33页,共49页，星期六，2024年，5月问题：A与B融合过程中，你能预见有哪些形式的细胞吗？A-B，A-A，B-B，A-A-A，B-B-B，A-A-B,B-B-A等多聚体。未融合的A，B。第34页,共49页，星期六，2024年，5月2杂种细胞筛选方法（1）细胞形态大小差异（2）选择性培养基筛选法：利用原生质体对培养基成分要求与反应的差异选择杂种细胞的方法。例如：利用抗性标记、酶缺陷型、激素需求差异等。亲本原生质体生长要求外源激素，而有的杂种细胞由于双亲互补作用会产生内激素，从而使杂种细胞能在无激素的培养基上生长。（3）再生后杂种与亲本形态、性质差异第35页,共49页，星期六，2024年，5月细胞融合例子3：

利用抗性标记进行第36页,共49页，星期六，2024年，5月第37页,共49页，星期六，2024年，5月第38页,共49页，星期六，2024年，5月第二部分体细胞杂交及其

在育种中的应用一体细胞杂交育种的意义1利于克服有性不亲和性，实现远源遗传重组。2问题：与基因工程改造相比有什么优点？植物的抗逆性多为多基因控制，因此易于实现多基因控制性状。第39页,共49页，星期六，2024年，5月3利于实现细胞质遗传形状的重组。细胞质遗传：由胞质遗传物质引起的遗传现象（又称非染色体遗传）。第40页,共49页，星期六，2024年，5月二技术路线关键技术：细胞融合组织培养第41页,共49页，星期六，2024年，5月三植物新品种培育举例例子：属间体细胞杂交第42页,共49页，星期六，2024年，5月油菜属于十字花科芸薹属

紫罗兰属于十字花科紫罗兰属

第43页,共49页，星期六，2024年，5月第44页,共49页，星期六，2024年，5月第45页,共49页，星期六，2024年，5月第46页,共49页，星期六，2024年，5月结果与讨论第47页,共49页，星期六，2024年，5月第48页,共49页，星期六，2024年，5月KM8P主要用于原生质体培养，其特点是有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素，呼吸代谢中的主要有机酸。第49页,共49页，星期六，2024年，5月新品种培育技术不亲和性不亲和性：在有性生殖过程中，由于生物个体的细胞或组织水平上的不协调而使受精或接合不能正常进行，或是受精后不能产生后代的现象。例如：生殖细胞不能融合，或受精卵不能发育，或子代无繁殖能力等。不亲和性是稳定物种的重要机理之。种间不亲和性：异种、异属生物个体之间的生殖不亲和现象常由染色体组的不同所造成种内不亲和性：种内个体间的不亲和现象往往是受不亲和基因所制约。第2页,共49页，星期六，2